| 查看: 3725 | 回复: 12 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
听雪看山木虫 (职业作家)
西游家族之T所长
|
[交流]
【求助/交流】从RNA到cDNA合成再到克隆PCR的实验技巧和操作细节问题若干，寻求解答 已有4人参与
|
||
|
因为自己是新手，在实验室这半年来，经历了很多失败和挫折！！目前的实验进展也不算特别顺，但是已经习惯和适应。然而还是有很多实验细节的东西不懂，主要是理论知识缺乏，对其特性了解的不够。寻求达人帮助，解答我心中的疑惑，问题如下： 1．RNA保存是不是必须和DNA隔离开，以防止污染？ 2．合成的RNA是不是必须等待在冰上融化，如果用手触摸使其溶化会不会有影响？到底是影响RNA的质量，还是cDNA的质量，或者两个都影响？ 3．cDNA的合成和RNA的合成过程都需要戴手套，其原因是不是只在于防止人体产生的酶的污染和在PCR过程中防止将其他杂质片段错误扩增？ 4．如果PCR产物经试剂盒纯化后浓度很低，在引物和其他试剂都没问题的基础上，问题是否有可能存在于cDNA加样过程中，比如PCR管里出现许多气泡，或试剂未混匀，或者加酶后没有放在冰上，没有立即P？ 5．RNA和cDNA是否都很脆弱，得到的cDNA是否要轻柔对待？如果涡旋液体，会不会影响cDNA的质量，比如DNA链条变成碎片，断裂等等。 因为自己的理论背景知识实在太缺乏了，所以有些专业用词不准确，还望见谅！！！ [ Last edited by 听雪看山 on 2010-5-19 at 22:03 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有237人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- pcr 带好宽啊!苦恼，求助ing!
已经有21人回复
- 提取的RNA暂时不用存放在多少度不会影响其质量啊
已经有18人回复
- 壳聚糖/β-GP水凝胶合成 求助
已经有25人回复
- 求助-基因克隆及引物设计的问题
已经有6人回复
- 重金求助基因克隆与功能验证方向 中文摘要350字左右翻译成英语 急！ 急！ 急！在线等
已经有3人回复
- 求助：约6kb质粒做模板的pcr程序怎么设定啊
已经有12人回复
- 如何判断一段CDNA是否是完整的
已经有4人回复
- invitrogen 的RNA提取中文版 trizol 法
已经有235人回复
- 关于RNA以及cDNA电泳问题，拜求各位大侠指点
已经有10人回复
- 【求助/交流】总RNA反转录出的cDNA 怎样检测出来
已经有9人回复
- 【求助/交流】如果提RNA的样品（叶片）有点降解，如何补救（尽量可以反转出CDNA）？
已经有5人回复
- 【求助/交流】求助高手-棉花中RNA提取质量验证及反转后cDNA质量验证问题
已经有13人回复
听雪看山
木虫 (职业作家)
西游家族之T所长
- 应助: 3 (幼儿园)
- 贵宾: 1.037
- 金币: 2112.6
- 散金: 3557
- 红花: 43
- 沙发: 3
- 帖子: 3644
- 在线: 445.1小时
- 虫号: 509830
- 注册: 2008-02-23
- 性别: MM
- 专业: 植物营养学
3楼2010-05-20 00:00:08
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):欢迎多多交流~~ 2010-05-20 21:48:14
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):欢迎多多交流~~ 2010-05-20 21:48:14
|
RNA的保存，可以保存在水溶液中（-80，无RNase的水）或者直接以沉淀形式保存在无水乙醇或者洁净的去离子甲酰胺中，至于要不要防止污染看实验的目的而定 合成的RNA（化学合成？很奢侈），我们一般都是提取的总RNA的可以放在冰上慢慢等，也可以握在手心融合，当然要带手套，防止RNase污染，因为RNase无处不在又很难失活， 有没有立即P不是问题，至于气泡也不是问题，94度的热循环，气泡很快就没了，至于条带弱通常问题是PCR的模板不纯，或者有抑制PCR的物质存在，若使用cDNA为模板，有可能你的基因表达量很低， 涡旋会影响质量，但对于做PCR可以忽略不计，因为PCR是级联放大反应，只要有一点模板cDNA就可以扩出所需条带，但是RNA和cDNA要避免反复冻融 |
2楼2010-05-19 22:18:13
4楼2010-05-20 09:33:37
jasco
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 1626.1
- 红花: 3
- 帖子: 991
- 在线: 82小时
- 虫号: 287776
- 注册: 2006-10-21
- 专业: 生物化学
5楼2010-05-20 09:42:35
