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jinling158

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】引物长的话退火温度应该升高还是降低? 已有6人参与

PCR退火温度与引物的长度、碱基组成及浓度等有很大的关系,但是一直想不通如果引物长度增加的话,是应该提高退火温度还是降低退火温度?理由是什么?望大家发表意见哈!
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
提高退火温度,特异性更强了,说明在更高的温度下就可以复性
2楼2010-05-06 23:38:15
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刘仕博

金虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
升高呗。
那个退火温度也是根据引物里面(A+T)和(G+C)的多少算出来的。一般的有关PCR实验操作的介绍里面都应该提到这一点,LZ可以稍微看下。
生命在于折腾~
3楼2010-05-07 12:19:47
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stliimoon

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
退火是解链,引物的长度长,升高退火温度,G+C含量高,退火温度升高!
4楼2010-05-07 12:40:00
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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
高。。。
5楼2010-05-07 12:49:31
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xudech

木虫 (正式写手)

xiaochong

引用回帖:
Originally posted by jinling158 at 2010-05-06 22:40:55:
PCR退火温度与引物的长度、碱基组成及浓度等有很大的关系,但是一直想不通如果引物长度增加的话,是应该提高退火温度还是降低退火温度?理由是什么?望大家发表意见哈!

计算一下就可以了
6楼2010-05-07 13:23:22
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hyde0706

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
一般来说是会升高,不过还是要看你PCR的目的是什么。单纯混得基因的话,一般选择通用的PCR程序就差不多了,比如55度退火,各种Tm的引物扩增的都不错。如果引物特异性不好,就要考虑提高温度来防止非特异扩增了。
7楼2010-05-07 14:25:42
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