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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】引物长的话退火温度应该升高还是降低？
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jinling158

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】引物长的话退火温度应该升高还是降低？ 已有6人参与

PCR退火温度与引物的长度、碱基组成及浓度等有很大的关系，但是一直想不通如果引物长度增加的话，是应该提高退火温度还是降低退火温度？理由是什么？望大家发表意见哈！
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1楼 2010-05-06 22:40:55
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
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提高退火温度，特异性更强了，说明在更高的温度下就可以复性
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2楼2010-05-06 23:38:15
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刘仕博

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
升高呗。
那个退火温度也是根据引物里面（A+T）和(G+C)的多少算出来的。一般的有关PCR实验操作的介绍里面都应该提到这一点，LZ可以稍微看下。
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生命在于折腾~
3楼2010-05-07 12:19:47
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stliimoon

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
退火是解链，引物的长度长，升高退火温度，G+C含量高，退火温度升高！
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4楼2010-05-07 12:40:00
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dy_414
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
高。。。
5楼2010-05-07 12:49:31
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xudech

木虫 (正式写手)

xiaochong
引用回帖:
Originally posted by jinling158 at 2010-05-06 22:40:55:
PCR退火温度与引物的长度、碱基组成及浓度等有很大的关系，但是一直想不通如果引物长度增加的话，是应该提高退火温度还是降低退火温度？理由是什么？望大家发表意见哈！

计算一下就可以了
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6楼2010-05-07 13:23:22
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hyde0706

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
一般来说是会升高，不过还是要看你PCR的目的是什么。单纯混得基因的话，一般选择通用的PCR程序就差不多了，比如55度退火，各种Tm的引物扩增的都不错。如果引物特异性不好，就要考虑提高温度来防止非特异扩增了。
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7楼2010-05-07 14:25:42
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