| 查看: 2705 | 回复: 7 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
proteinwang铜虫 (正式写手)
|
[交流]
【求助/交流】考马斯亮兰法（Bradford法）测定蛋白浓度事宜请教！ 已有7人参与
|
|||
|
前段时间做考马斯亮兰法（Bradford法）测定蛋白浓度时，测定OD595nm处的值比较低，现向大家请教一下在此试验过程中的注意事项。 1、考马斯亮兰G―250染料试剂的配制过程中，考马斯亮兰G―250必须先溶于95%的乙醇后，再添加85%的磷酸，最后定容吗？是不是可以把考马斯亮兰G―250，95%的乙醇和85%的磷酸一块放到容器中，然后溶解后定容呢？ 2、用1.0mg/ml的标准蛋白质溶液给各试管分别 加入：0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml，然后用无离子水补充到0.1ml。最后各试管中分别加入5.0ml考马斯亮兰 G―250试剂，每加完一管，立即在旋涡混合器上混合，5min后测定其OD595，测得值比较低，且基本没有规律性，不知道是什么原因？ 请成功做过相关实验的高手给予解答！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白相关 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有292人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 考马斯亮蓝测定蛋白的结果受蛋白的分子量大小的影响吗？
已经有9人回复
- 考马斯亮蓝法测蛋白含量时吸光度A595nm为负值！！！求助
已经有11人回复
- 考马斯亮蓝法测蛋白质含量
已经有12人回复
- 【求助/交流】请问做蛋白质消化用考马斯亮蓝法还是福林-酚法检测好？
已经有5人回复
- 【求助/交流】【求助】考马斯亮蓝测蛋白出现絮状沉淀
已经有14人回复
- 【求助/交流】考马斯亮蓝法测定蛋白质的标准曲线
已经有9人回复
- 【求助/交流】[求助]考马斯亮蓝法测定蛋白质的问题
已经有3人回复
- 【求助】考马斯测定蛋白质含量时稀释倍数怎么定
已经有7人回复
- 【求助/交流】关于考马斯亮蓝法测定蛋白含量的问题
已经有18人回复
richujs
木虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1926.9
- 散金: 299
- 红花: 2
- 帖子: 919
- 在线: 79小时
- 虫号: 204758
- 注册: 2006-03-02
- 性别: GG
- 专业: 食品科学
4楼2010-05-01 10:32:34
2楼2010-04-30 19:41:33
weiyanbme
木虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 3828.5
- 红花: 1
- 帖子: 458
- 在线: 295.5小时
- 虫号: 333351
- 注册: 2007-03-28
- 专业: 生物材料
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):欢迎回来多多交流~~ 2010-04-30 20:30
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):欢迎回来多多交流~~ 2010-04-30 20:30
|
看你的过程应该是在比色皿里做的，我是用酶标仪做的，直接在96孔板里做，你的方案我在网上也找到过，最后再96孔板里做的，也不是很好，后来把总体积减少了，200μl的染液，30μl的蛋白溶液，测得的结果线性还是不错的；当然有时候你做出趋势曲线后，发现要测得的蛋白浓度无法计算，就是说你的稀释度还要降低，所以一般最少要做个0.1以及1.0的标准曲线 另外，我配制的染液根本没定容，直接用量筒量取体积数，做的结果线性还是不错的，最后的浓度也跟我用其他的方法相差不大； 建议再做一次，本来这个方法就不是很精确的，看看文献，多是BCA法，为什么不出现这个方法呢？想想就明白了，这个方法也就平时做起来简单些，要发paper还是的得试剂盒了 |
3楼2010-04-30 19:44:11
5楼2010-05-02 13:05:50
20