应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】ELISA实验结果全阳性？？
61/1返回列表
查看: 1432  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

吓猴蹲

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】ELISA实验结果全阳性？？ 已有5人参与

原理：
以多聚酪氨酸多肽为底物，在ATP存在条件下，用提取的酪氨酸激酶催化底物酪氨酸的磷酸化，用酶标记的单克隆抗体检测酪氨酸磷酸化程度，以OPD做为辣根过氧化物酶底物显色。

实验过程中，设置酶浓度固定，ATP浓度递减，想寻找最适ATP浓度，但是结果发现不同ATP对应的OD值相同，无梯度变化，请教各位，什么原因呢？

本考虑是否因为酶的浓度太低，ATP均过量导致此结果，但未加ATP的孔应该不发生反应，且OD值也应该很低才对啊，不知道为什么OD值这么高呢，请各位指点指点，谢谢！附上数据。
ATP浓度                       OD值
100uM                                 2.611
10                                 2.173
5                                 1.944
2.5                                 2.063
1.25                                2.128
0.625                                2.122
0                                2.326
100uMATP,不加酶            0.189
不加ATP和酶            0.215
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
一分一分，省到结婚
1楼 2010-04-29 18:23:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

plantaqp

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2):good 2010-04-29 23:52
每个浓度只有一个OD值？每个浓度也要有梯度的，因为Elisa实验的viaribility 是比较大的。实验没有重复很难讲的。如果你是多组实验的均值，那么就可能是ATP浓度浓度太高了。

[ Last edited by plantaqp on 2010-4-29 at 19:02 ]
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-04-29 18:59:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yunaitong

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是你血清浓度没有稀释的问题吧~~
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-04-29 19:32:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吓猴蹲

木虫 (正式写手)
我也考虑过可能是ATP过量的问题，但不加ATP加酶的孔OD值也很高，现在我们考虑是酶的非特异性吸附比较严重，后来实验发现酶的量变小，洗脱的时间延长可以稍微减少非特异性吸附，但如何避免出现非特异性吸附呢？有什么好的办法，请各位指点，谢谢！！！
赞一下 回复此楼
一分一分，省到结婚
4楼2010-05-12 15:18:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

iamzhihui

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
洗版的时候要低浓度那头稍微向上倾斜，是不是在洗版的时候，高浓度的进入低浓度的孔里面了么？ELISA实验感觉细节挺重要的。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-05-13 10:14:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangwensh

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主还在做ELISA吗？可否把您当年做的这个方法步骤分享一下？我不是很懂想学习学习！
赞一下 回复此楼
6楼2013-09-13 08:54:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 吓猴蹲 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +4 守候夕阳CF 2026-03-18 4/200 2026-03-18 22:16 by li123456789.
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +8 llllkkkhh 2026-03-18 8/400 2026-03-18 21:01 by Catalysis25
[考研] 266求调剂 +5 阳阳哇塞 2026-03-14 9/450 2026-03-18 15:05 by stone_128
[考研] 材料专硕306英一数二 +10 z1z2z3879 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:20 by 007_lilei
[考研] 302求调剂 +10 呼呼呼。。。。 2026-03-17 10/500 2026-03-18 12:45 by Linda Hu
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
[考研] 268求调剂 +6 简单点0 2026-03-17 6/300 2026-03-18 09:04 by 无际的草原
[考研] 278求调剂 +5 烟火先于春 2026-03-17 5/250 2026-03-18 08:43 by 星空星月
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +6 薛云鹏 2026-03-15 6/300 2026-03-17 11:05 by 学员h26Tkc
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨； 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗？ 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 中科大材料与化工319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:10 by ms629
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
[考研] 328化工专硕求调剂 +4 。，。，。，。i 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:44 by JourneyLucky
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 321求调剂（食品/专硕） +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭