应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】ELISA实验结果全阳性？？
61/1返回列表
查看: 1724  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

吓猴蹲

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】ELISA实验结果全阳性？？ 已有5人参与

原理：
以多聚酪氨酸多肽为底物，在ATP存在条件下，用提取的酪氨酸激酶催化底物酪氨酸的磷酸化，用酶标记的单克隆抗体检测酪氨酸磷酸化程度，以OPD做为辣根过氧化物酶底物显色。

实验过程中，设置酶浓度固定，ATP浓度递减，想寻找最适ATP浓度，但是结果发现不同ATP对应的OD值相同，无梯度变化，请教各位，什么原因呢？

本考虑是否因为酶的浓度太低，ATP均过量导致此结果，但未加ATP的孔应该不发生反应，且OD值也应该很低才对啊，不知道为什么OD值这么高呢，请各位指点指点，谢谢！附上数据。
ATP浓度                       OD值
100uM                                 2.611
10                                 2.173
5                                 1.944
2.5                                 2.063
1.25                                2.128
0.625                                2.122
0                                2.326
100uMATP,不加酶            0.189
不加ATP和酶            0.215
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
一分一分，省到结婚
1楼 2010-04-29 18:23:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

plantaqp

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2):good 2010-04-29 23:52
每个浓度只有一个OD值？每个浓度也要有梯度的，因为Elisa实验的viaribility 是比较大的。实验没有重复很难讲的。如果你是多组实验的均值，那么就可能是ATP浓度浓度太高了。

[ Last edited by plantaqp on 2010-4-29 at 19:02 ]
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-04-29 18:59:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yunaitong

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是你血清浓度没有稀释的问题吧~~
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-04-29 19:32:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吓猴蹲

木虫 (正式写手)
我也考虑过可能是ATP过量的问题，但不加ATP加酶的孔OD值也很高，现在我们考虑是酶的非特异性吸附比较严重，后来实验发现酶的量变小，洗脱的时间延长可以稍微减少非特异性吸附，但如何避免出现非特异性吸附呢？有什么好的办法，请各位指点，谢谢！！！
赞一下 回复此楼
一分一分，省到结婚
4楼2010-05-12 15:18:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

iamzhihui

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
洗版的时候要低浓度那头稍微向上倾斜，是不是在洗版的时候，高浓度的进入低浓度的孔里面了么？ELISA实验感觉细节挺重要的。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-05-13 10:14:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangwensh

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主还在做ELISA吗？可否把您当年做的这个方法步骤分享一下？我不是很懂想学习学习！
赞一下 回复此楼
6楼2013-09-13 08:54:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 吓猴蹲 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 6/300 2026-08-23 14:45 by KM5EcsNQRBPn
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +3 process2012 2026-08-23 4/200 2026-08-23 12:54 by huixian257
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 h4CP7TrQR8Lg 2026-08-22 5/250 2026-08-23 12:09 by LR9qGULyN2ew
[基金申请] 什么时候开奖？ +9 CrisMessi 2026-08-18 10/500 2026-08-23 12:03 by 丶昵称占用
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +12 大萍1987 2026-08-20 14/700 2026-08-23 10:30 by wrm
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 04:04 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 03:52 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭