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吓猴蹲木虫 (正式写手)
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[交流]
【求助/交流】ELISA实验结果全阳性？？已有5人参与
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原理： 以多聚酪氨酸多肽为底物，在ATP存在条件下，用提取的酪氨酸激酶催化底物酪氨酸的磷酸化，用酶标记的单克隆抗体检测酪氨酸磷酸化程度，以OPD做为辣根过氧化物酶底物显色。 实验过程中，设置酶浓度固定，ATP浓度递减，想寻找最适ATP浓度，但是结果发现不同ATP对应的OD值相同，无梯度变化，请教各位，什么原因呢？ 本考虑是否因为酶的浓度太低，ATP均过量导致此结果，但未加ATP的孔应该不发生反应，且OD值也应该很低才对啊，不知道为什么OD值这么高呢，请各位指点指点，谢谢！附上数据。 ATP浓度 OD值 100uM 2.611 10 2.173 5 1.944 2.5 2.063 1.25 2.128 0.625 2.122 0 2.326 100uMATP,不加酶 0.189 不加ATP和酶 0.215 |
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5楼2010-05-13 10:14:02