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吓猴蹲

木虫 (正式写手)

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专业: 药物化学

[交流] 【求助/交流】ELISA实验结果全阳性？？已有5人参与

原理：
以多聚酪氨酸多肽为底物，在ATP存在条件下，用提取的酪氨酸激酶催化底物酪氨酸的磷酸化，用酶标记的单克隆抗体检测酪氨酸磷酸化程度，以OPD做为辣根过氧化物酶底物显色。

实验过程中，设置酶浓度固定，ATP浓度递减，想寻找最适ATP浓度，但是结果发现不同ATP对应的OD值相同，无梯度变化，请教各位，什么原因呢？

本考虑是否因为酶的浓度太低，ATP均过量导致此结果，但未加ATP的孔应该不发生反应，且OD值也应该很低才对啊，不知道为什么OD值这么高呢，请各位指点指点，谢谢！附上数据。
ATP浓度                OD值
100uM                            2.611
10                            2.173
5                            1.944
2.5                            2.063
1.25                         2.128
0.625                         2.122
0                         2.326
100uMATP,不加酶       0.189
不加ATP和酶       0.215

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