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anan4545

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】如何制备氨基酸与BSA的结合物已有5人参与

我打算做westen blot。实验室有买的D-serine antibody。说明书上写,用D-serine  通过glutaraldehyde结合BSA,得到的结合物作为免疫原。请问如何合成D-serine - glutaraldehyde-BSA结合物。具体反应步骤,包括加样顺序,各物质的配比,pH,温度等。以及如何确认生成了D-serine - glutaraldehyde-BSA结合物。产物如何处理纯化以确定结合物中的BSA和D-serine的浓度?还有,生成的结合物如何处理纯化,以用于SDS-PAGE上样,包括除盐和调pH等。谢谢!

[ Last edited by anan4545 on 2010-7-16 at 17:11 ]
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轻诺必寡信,多易必多难
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人


anan4545(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by anan4545 at 2010-07-16 16:16:19:
我打算做westen blot。实验室有买的D-serine antibody。说明书上写,用D-serine  通过glutaraldehyde结合BSA,得到的结合物作为免疫原。请问如何合成D-serine - glutaraldehyde-BSA结合物。具体反应步骤,包括加样 ...

不懂帮顶
小木虫之有关部门负责人
2楼2010-07-16 17:58:35
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pheres8

木虫 (著名写手)


anan4545(金币+1):谢谢参与
帮顶 希望大虾出现
3楼2010-07-16 19:23:41
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)


anan4545(金币+1):谢谢参与
anan4545(金币+3):谢谢您的提示,thank you! 2010-07-17 19:47:57
引用回帖:
Originally posted by anan4545 at 2010-07-16 16:16:19:
我打算做westen blot。实验室有买的D-serine antibody。说明书上写,用D-serine  通过glutaraldehyde结合BSA,得到的结合物作为免疫原。请问如何合成D-serine - glutaraldehyde-BSA结合物。具体反应步骤,包括加样 ...

我想说明书上介绍的应该是他这个D-serine antibody制备的免疫原是D-serine - glutaraldehyde-BSA。在这里glutaraldehyde是偶联剂,利用它上面的基团将serine的羧基和BSA上的氨基结合。你找下关于glutaraldehyde的偶联方案就知道怎么做了。
52187644
4楼2010-07-16 21:16:25
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anan4545

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by dianaofyezi at 2010-07-16 21:16:25:



我想说明书上介绍的应该是他这个D-serine antibody制备的免疫原是D-serine - glutaraldehyde-BSA。在这里glutaraldehyde是偶联剂,利用它上面的基团将serine的羧基和BSA上的氨基结合。你找下关于glutaralde ...

谢谢您的回复。我刚在网上找到介绍如何conjugate BSA and amino acid。不过还没找到测定的方法。BSA有约59个lysine残基,大概有30个左右可以结合其他化合物。所以我想知道如何分离未反应的BSA和BSA结合物;如何测定结合物中BSA和氨基酸的含量?如果有不过柱子就能测定的方法最好。
轻诺必寡信,多易必多难
5楼2010-07-17 19:45:09
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)

anan4545(金币+2):谢谢您的热心应助 2010-07-19 12:38:34
未结合的BSA应该对你的WB没有多少影响的。测定方法有些会用到连续的分光光度计测定。
52187644
6楼2010-07-18 12:21:11
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anan4545

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by dianaofyezi at 2010-07-18 12:21:11:
未结合的BSA应该对你的WB没有多少影响的。测定方法有些会用到连续的分光光度计测定。

真的很感谢您的热心回复。
如果只是定性,未结合的BSA对WB没有多少影响, 但是定量,我还得确定抗原BSA complex的浓度,最重要的是想知道complex中氨基酸的浓度。ELISA已经做过了,现在老板想要wb的数据。我也是新手,对wb了解的也不是很透彻。
轻诺必寡信,多易必多难
7楼2010-07-19 12:37:01
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henkally

禁虫 (著名写手)


anan4545(金币+1):谢谢参与
anan4545(金币+11):谢谢你的建议。估计帖子已经沉了,剩余的金币可能给不出去了,就全给你了,请笑纳 2010-07-26 16:51:12
本帖内容被屏蔽

8楼2010-07-20 12:08:44
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