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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】如何制备氨基酸与BSA的结合物
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anan4545

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】如何制备氨基酸与BSA的结合物 已有5人参与

我打算做westen blot。实验室有买的D-serine antibody。说明书上写，用D-serine  通过glutaraldehyde结合BSA，得到的结合物作为免疫原。请问如何合成D-serine - glutaraldehyde-BSA结合物。具体反应步骤，包括加样顺序，各物质的配比，pH，温度等。以及如何确认生成了D-serine - glutaraldehyde-BSA结合物。产物如何处理纯化以确定结合物中的BSA和D-serine的浓度？还有，生成的结合物如何处理纯化，以用于SDS-PAGE上样，包括除盐和调pH等。谢谢！

[ Last edited by anan4545 on 2010-7-16 at 17:11 ]
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轻诺必寡信，多易必多难
1楼 2010-07-16 16:16:19
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
★
anan4545(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by anan4545 at 2010-07-16 16:16:19:
我打算做westen blot。实验室有买的D-serine antibody。说明书上写，用D-serine  通过glutaraldehyde结合BSA，得到的结合物作为免疫原。请问如何合成D-serine - glutaraldehyde-BSA结合物。具体反应步骤，包括加样 ...

不懂帮顶
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小木虫之有关部门负责人
2楼2010-07-16 17:58:35
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pheres8

木虫 (著名写手)
★
anan4545(金币+1):谢谢参与
帮顶 希望大虾出现
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3楼2010-07-16 19:23:41
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★
anan4545(金币+1):谢谢参与
anan4545(金币+3):谢谢您的提示，thank you！ 2010-07-17 19:47:57
引用回帖:
Originally posted by anan4545 at 2010-07-16 16:16:19:
我打算做westen blot。实验室有买的D-serine antibody。说明书上写，用D-serine  通过glutaraldehyde结合BSA，得到的结合物作为免疫原。请问如何合成D-serine - glutaraldehyde-BSA结合物。具体反应步骤，包括加样 ...

我想说明书上介绍的应该是他这个D-serine antibody制备的免疫原是D-serine - glutaraldehyde-BSA。在这里glutaraldehyde是偶联剂，利用它上面的基团将serine的羧基和BSA上的氨基结合。你找下关于glutaraldehyde的偶联方案就知道怎么做了。
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52187644
4楼2010-07-16 21:16:25
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anan4545

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by dianaofyezi at 2010-07-16 21:16:25:



我想说明书上介绍的应该是他这个D-serine antibody制备的免疫原是D-serine - glutaraldehyde-BSA。在这里glutaraldehyde是偶联剂，利用它上面的基团将serine的羧基和BSA上的氨基结合。你找下关于glutaralde ...

谢谢您的回复。我刚在网上找到介绍如何conjugate BSA and amino acid。不过还没找到测定的方法。BSA有约59个lysine残基，大概有30个左右可以结合其他化合物。所以我想知道如何分离未反应的BSA和BSA结合物；如何测定结合物中BSA和氨基酸的含量？如果有不过柱子就能测定的方法最好。
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轻诺必寡信，多易必多难
5楼2010-07-17 19:45:09
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
anan4545(金币+2):谢谢您的热心应助 2010-07-19 12:38:34
未结合的BSA应该对你的WB没有多少影响的。测定方法有些会用到连续的分光光度计测定。
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52187644
6楼2010-07-18 12:21:11
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anan4545

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by dianaofyezi at 2010-07-18 12:21:11:
未结合的BSA应该对你的WB没有多少影响的。测定方法有些会用到连续的分光光度计测定。

真的很感谢您的热心回复。
如果只是定性，未结合的BSA对WB没有多少影响， 但是定量，我还得确定抗原BSA complex的浓度，最重要的是想知道complex中氨基酸的浓度。ELISA已经做过了，现在老板想要wb的数据。我也是新手，对wb了解的也不是很透彻。
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轻诺必寡信，多易必多难
7楼2010-07-19 12:37:01
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henkally

禁虫 (著名写手)
★
anan4545(金币+1):谢谢参与
anan4545(金币+11):谢谢你的建议。估计帖子已经沉了，剩余的金币可能给不出去了，就全给你了，请笑纳 2010-07-26 16:51:12
本帖内容被屏蔽
8楼2010-07-20 12:08:44
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