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小周

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】请大家看一下我设计的一个ELISA实验 已有4人参与

最近用细胞表达一种蛋白,设计ELISA方法进行定量。
蛋白上连着一个HIS-TAG ,我打算将抗HIS-TAG的抗体包到酶标板上,封闭,上样,再加抗该种蛋白的抗体,该抗体上偶联HRP,TMB显色。
麻烦各位看一下我这样做有问题吗?
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 小周 at 2010-04-28 17:25:48:



HIS-TAG 的暴露度,不太清楚。ELISA 是可以用来定量啊。反过来,你是说用抗该种蛋白的抗体用来包被,加样,加 HIS-TAG 抗体(为鼠抗HIS-TAG),然后加抗鼠-HRP标记的二抗吗?
您说的很有道理,谢谢了啊!

ELISA只能作为半定量使用,是不能绝对定量的,只要是半定量就需要你做标准曲线,不然的话你怎么量化?
For my life!
5楼2010-05-03 10:51:04
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客

★ ★
1949stone(金币+1): 2010-04-28 18:05
1949stone(金币+1): 2010-04-28 18:05
1949stone(金币+1): 2010-04-28 18:05
lstt09nk(金币+1): 2010-04-28 18:06
lstt09nk(金币-2):1949stone斑斑网络问题,现减去部分金币,请虫友见谅~~ 2010-04-28 21:08
应该会有问题……
你的His暴露的充分度怎么样?反过来还好一些……
再者,ELISA本身就是半定量,你没有标样怎么定量?
For my life!
2楼2010-04-28 16:50:03
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jasco

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这样不行的,抗his-tag的抗体可不只识别你重组蛋白的his标签,,,,
3楼2010-04-28 16:59:48
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小周

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by winter_gates at 2010-04-28 16:50:03:
应该会有问题……
你的His暴露的充分度怎么样?反过来还好一些……
再者,ELISA本身就是半定量,你没有标样怎么定量?

HIS-TAG 的暴露度,不太清楚。ELISA 是可以用来定量啊。反过来,你是说用抗该种蛋白的抗体用来包被,加样,加 HIS-TAG 抗体(为鼠抗HIS-TAG),然后加抗鼠-HRP标记的二抗吗?
您说的很有道理,谢谢了啊!
4楼2010-04-28 17:25:48
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