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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请大家看一下我设计的一个ELISA实验
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小周

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】请大家看一下我设计的一个ELISA实验 已有4人参与

最近用细胞表达一种蛋白，设计ELISA方法进行定量。
蛋白上连着一个HIS-TAG ,我打算将抗HIS-TAG的抗体包到酶标板上，封闭，上样，再加抗该种蛋白的抗体，该抗体上偶联HRP，TMB显色。
麻烦各位看一下我这样做有问题吗？
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1楼 2010-04-28 16:09:23
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
★ ★
1949stone(金币+1): 2010-04-28 18:05
1949stone(金币+1): 2010-04-28 18:05
1949stone(金币+1): 2010-04-28 18:05
lstt09nk(金币+1): 2010-04-28 18:06
lstt09nk(金币-2):1949stone斑斑网络问题，现减去部分金币，请虫友见谅~~ 2010-04-28 21:08
应该会有问题……
你的His暴露的充分度怎么样？反过来还好一些……
再者，ELISA本身就是半定量，你没有标样怎么定量？
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For my life！
2楼2010-04-28 16:50:03
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jasco

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这样不行的，抗his-tag的抗体可不只识别你重组蛋白的his标签，，，，
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3楼2010-04-28 16:59:48
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小周

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by winter_gates at 2010-04-28 16:50:03:
应该会有问题……
你的His暴露的充分度怎么样？反过来还好一些……
再者，ELISA本身就是半定量，你没有标样怎么定量？

HIS-TAG 的暴露度，不太清楚。ELISA 是可以用来定量啊。反过来，你是说用抗该种蛋白的抗体用来包被，加样，加 HIS-TAG 抗体（为鼠抗HIS-TAG）,然后加抗鼠-HRP标记的二抗吗？
您说的很有道理，谢谢了啊！
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4楼2010-04-28 17:25:48
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 小周 at 2010-04-28 17:25:48:



HIS-TAG 的暴露度，不太清楚。ELISA 是可以用来定量啊。反过来，你是说用抗该种蛋白的抗体用来包被，加样，加 HIS-TAG 抗体（为鼠抗HIS-TAG）,然后加抗鼠-HRP标记的二抗吗？
您说的很有道理，谢谢了啊！

ELISA只能作为半定量使用，是不能绝对定量的，只要是半定量就需要你做标准曲线，不然的话你怎么量化？
赞一下(1人) 回复此楼
For my life！
5楼2010-05-03 10:51:04
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zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
抗his-tag的抗体还会结合含高his的蛋白
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终于熬成木虫了……
6楼2010-05-04 05:27:06
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