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铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】请大家看一下我设计的一个ELISA实验已有4人参与

最近用细胞表达一种蛋白，设计ELISA方法进行定量。
蛋白上连着一个HIS-TAG ,我打算将抗HIS-TAG的抗体包到酶标板上，封闭，上样，再加抗该种蛋白的抗体，该抗体上偶联HRP，TMB显色。
麻烦各位看一下我这样做有问题吗？

1楼 2010-04-28 16:09:23

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铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:

Originally posted by winter_gates at 2010-04-28 16:50:03:
应该会有问题……
你的His暴露的充分度怎么样？反过来还好一些……
再者，ELISA本身就是半定量，你没有标样怎么定量？

HIS-TAG 的暴露度，不太清楚。ELISA 是可以用来定量啊。反过来，你是说用抗该种蛋白的抗体用来包被，加样，加 HIS-TAG 抗体（为鼠抗HIS-TAG）,然后加抗鼠-HRP标记的二抗吗？
您说的很有道理，谢谢了啊！

4楼2010-04-28 17:25:48

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