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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒电泳中的三条带
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liuwei78

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒电泳中的三条带 已有13人参与

我的质粒电泳跑出的是三条带，从上到下应该是开环、线性和超螺旋吧。可以将其中的线性条带同marker比较么？我比较出来的长度同我预期的质粒长度不同，该怎么解释呢？
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1楼 2010-04-21 09:39:47
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czhsr1123

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
琼脂糖电泳进行鉴定质粒DNA时，多数情况下你能看到三条带，但千万不要认为你看到的是超螺旋、线性和开环这三条带。碱法抽提得到质粒样品中不含线性DNA，不信的话，你用酶切来线性化质粒后，再进行琼脂糖电泳，就会看到线性质粒DNA的位置与这三条带的位置不一样。其实这三条带以电泳速度的快慢而排序，分别是超螺旋、开环和复制中间体（即没有复制完全的两个质粒连在了一起）。如果你不小心在溶液II加入后过度振荡，会有第四条带，这条带泳动得较慢，远离这三条带，是20-100kb的大肠杆菌基因组DNA的片断。
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8楼2010-04-23 20:43:50
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-04-21 13:59
没有酶切的质粒比较大小无任何意义～建议单酶切检验，
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2楼2010-04-21 10:34:29
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+4): 2010-04-21 11:25
琼脂糖电泳进行鉴定质粒DNA时，多数情况下你能看到三条带，但千万不要认为你看到的是超螺旋、线性和开环这三条带。碱法抽提得到质粒样品中不含线性DNA，不信的话，你用酶切来线性化质粒后，再进行琼脂糖电泳，就会看到线性质粒DNA的位置与这三条带的位置不一样。其实这三条带以电泳速度的快慢而排序，分别是超螺旋、开环和复制中间体（即没有复制完全的两个质粒连在了一起）。如果你不小心在溶液II加入后过度振荡，会有第四条带，这条带泳动得较慢，远离这三条带，是20-100kb的大肠杆菌基因组DNA的片断。
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3楼2010-04-21 10:39:59
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)
1949stone(金币+3): 2010-04-21 13:59
sutao1979(金币-3):重复了 2010-04-21 15:52
1949stone:的确是我搞错了 向你道歉 2010-04-24 10:28
琼脂糖电泳进行鉴定质粒DNA时，多数情况下你能看到三条带，但千万不要认为你看到的是超螺旋、线性和开环这三条带。碱法抽提得到质粒样品中不含线性DNA，不信的话，你用酶切来线性化质粒后，再进行琼脂糖电泳，就会看到线性质粒DNA的位置与这三条带的位置不一样。其实这三条带以电泳速度的快慢而排序，分别是超螺旋、开环和复制中间体（即没有复制完全的两个质粒连在了一起）。如果你不小心在溶液II加入后过度振荡，会有第四条带，这条带泳动得较慢，远离这三条带，是20-100kb的大肠杆菌基因组DNA的片断。
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4楼2010-04-21 10:40:45
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