24小时热门版块排行榜    

查看: 2299  |  回复: 19
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

695

木虫 (职业作家)

[交流] 【求助/交流】western blot求救(已更新) 已有6人参与

各位好,最近在做原核表达,原核表达的是含GST的融合目的蛋白(98kD),湿转1个小时,TBST+5%Milk封闭1-2个小时,1抗GST(sigma)在TBST+0.5%milk4度摇床过夜,然后清洗三次,2抗在室温TBST+0.5%milk1.5-2个多小时,然后TBST 洗脱3次,用SuperSignal West Femto Maximum Sensitivity Substrate显色,结果显出来的带跟我胶上的条带几乎完全一致,这可能是什么原因呢?抗体都是1:2500稀释的。多谢各位指点,第一次接触,谢谢了




[ Last edited by 695 on 2010-4-24 at 05:19 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

695

木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2010-04-22 09:04:15:
牛奶?BSA?

我用的是TBST milk
9楼2010-04-22 21:32:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2): 2010-04-21 11:25
结果显出来的带跟我胶上的条带几乎完全一致?

是什么意思?
2楼2010-04-21 08:48:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)


★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1): 2010-04-21 11:25
他意思是没有特异性的蛋白全跑上面去了,而且还带了标签的。我觉得膜有问题
3楼2010-04-21 10:40:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
scelab(金币+2):warm-hearted 2010-04-22 11:18
是不是说,胶先用丽春红染了一下,发现很多带,然后电转,曝光后发现膜上的带跟胶上染色的效果是一样的

严重怀疑没封闭好,换个封闭液试试
4楼2010-04-21 13:53:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 02:01 by Ie9AyIAvGbvs
[基金申请] 基金不中,共勉 +5 eulota 2026-08-26 5/250 2026-08-26 23:33 by young90
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +3 a089 2026-08-26 3/150 2026-08-26 23:21 by young90
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 科研孤儿太难了 +21 我4大白菜 2026-08-20 22/1100 2026-08-26 11:29 by nlgza
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +4 叶九微 2026-08-26 4/200 2026-08-26 10:52 by xiacongxu
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
信息提示
请填处理意见