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新人小玥

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】western blot 已有3人参与

请给我指点一下,做western blot转膜后,用丽春红染色已经有条带出现,然后加一抗二抗之后没有任何东西,会是什么原因呢?
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新人小玥

木虫 (正式写手)

忘记说了,我的蛋白量比较小,一抗和二抗都是孵育1个半小时
2楼2010-04-17 22:40:52
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cyjwx123

铁虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+5):热心虫友,欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-18 01:41
scelab:你可以点升级了,看右上角的“升级” 2010-04-18 01:41
用丽春红染色有颜色这说明你之前转膜是没有问题的,有蛋白。至于你后面为什么没有出现条带,我觉得跟你这一抗有很大关系。二抗应该没有什么问题的,因为都是根据一抗的来源制造的,有普遍适用性。你的一抗可能和目的蛋白不结合,或者结合很弱,使得二抗的信号放大没有检测到条带。其实从一抗到最后的显影,之间的过程太多,都有一定的可能性。
看的开才是真本事~
3楼2010-04-17 23:44:07
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新人小玥

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by cyjwx123 at 2010-04-17 23:44:07:
用丽春红染色有颜色这说明你之前转膜是没有问题的,有蛋白。至于你后面为什么没有出现条带,我觉得跟你这一抗有很大关系。二抗应该没有什么问题的,因为都是根据一抗的来源制造的,有普遍适用性。你的一抗可能和目 ...

那么如果我将一抗的孵育时间增加,会不会有一定的帮助?
4楼2010-04-18 09:05:15
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奋斗的猪猪

银虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果确定一抗没有问题的话,你应该你所有的药品检查一下,浓度,pH值之类。
一抗一个半小时应该足够了。还有二抗是买来的吧,说明书上说用那么长时间吗?
5楼2010-04-18 09:22:12
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cyjwx123

铁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我觉得将一抗的孵育时间增加,不一定有帮助,因为太久了的话可能增加一抗和膜上的非特异性蛋白结合,导致假阳性。
看的开才是真本事~
6楼2010-05-03 16:25:42
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