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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】急！SDS-page电泳成像
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na_8337

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】急！SDS-page电泳成像 已有3人参与

急求助：SDS-page除了用凝胶成像仪，还可以用什么看胶？用紫外可以么？或者用什么工具可以计算蛋白的大小？谢谢！急！急！急
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1楼 2010-01-30 08:03:01
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雨中蜗牛

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
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amisking(金币+2): 2010-01-30 13:13
用考马斯廖兰染色啊  染半个小时在脱色就行了
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■如果如果有一天?k忘記了沵爾一定要記得曾經有一個傻孩子?圻^爾
2楼2010-01-30 08:36:47
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na_8337

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 雨中蜗牛 at 2010-01-30 08:36:47:
用考马斯廖兰染色啊  染半个小时在脱色就行了

呵呵，我知道，我的意思是脱完色没有凝胶呈现仪模糊一片可以辨认清楚么
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3楼2010-01-30 09:51:20
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夏末

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
amisking(金币+3): 2010-01-30 13:13
脱完色就应该能辨认清楚了，只要加了marker，尺子量一下就可以算出大概的分子量，如果说模糊一片看不清楚，那应该是电泳的问题，在凝胶成像仪下观察也看不清楚吧，难道楼主看清楚了？
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爱国爱家爱实验 看雨看雪看文献
4楼2010-01-30 12:20:04
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
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amisking(金币+2): 2010-01-30 13:13
用扫描仪啊，比凝胶成像仪效果好多了，数码相机也可以啊，不是紫外灯下看，为什么非得凝胶成像仪，想不开啊
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5楼2010-01-30 12:49:03
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★
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amisking(金币+2): 2010-01-30 13:50
有图有真相，上图！

分子量的计算或者估算只通过一种方法是不够准确的，只跑一个变性胶，依靠MARKER才估算只能是一个大概，而且分子量的大小跟条带的迁移率不是简单的直线关系，换算稍微有点依靠经验的成分。再之，SDS之后的蛋白质四级结构是被破坏了的，要是多亚基的话就更难估计了。看样子楼主是新手。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2010-01-30 13:39:03
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na_8337

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2010-01-30 13:39:03:
有图有真相，上图！

分子量的计算或者估算只通过一种方法是不够准确的，只跑一个变性胶，依靠MARKER才估算只能是一个大概，而且分子量的大小跟条带的迁移率不是简单的直线关系，换算稍微有点依靠经验的成分。再 ...

看来你是高手
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7楼2010-02-21 11:04:19
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cqukhk

金虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2010-01-30 13:39:03:
有图有真相，上图！

分子量的计算或者估算只通过一种方法是不够准确的，只跑一个变性胶，依靠MARKER才估算只能是一个大概，而且分子量的大小跟条带的迁移率不是简单的直线关系，换算稍微有点依靠经验的成分。再 ...

请问，如果多亚基，会完全打断吗？我测定一个酶的分子量，低于一万，我表示怀疑。。
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7月30日，答应妹子不抽烟，切记，切记
8楼2011-04-15 14:08:47
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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dhd997(金币+6, EPI+1): good 2011-04-16 09:20:02
引用回帖:
Originally posted by cqukhk at 2011-04-15 14:08:47:
请问，如果多亚基，会完全打断吗？我测定一个酶的分子量，低于一万，我表示怀疑。。

SDS是变性剂，有时候还加巯基乙醇（能把二硫键还原成巯基从而破坏四级结构），所以SDS-PAGE应该是得到单条多肽的。

一个酶的分子量为一万，依照氨基酸的平均分子量为128，算得约为78个残基，ORF才234bp，算是很小的酶了。不过各种酶的一般分子量都有差别的，即使是同一种酶也还是有差别的。

核糖核酸酶和溶菌酶里都有分子量很小的成员，从10KD到100KD都有，所以如果你的酶真的很小，只要验证是正确的就不要担心。

看附件

[ Last edited by 冼亮淀粉酶 on 2011-4-15 at 20:06 ]
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
9楼2011-04-15 20:04:59
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chu_81

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
低于1万的蛋白要成酶，很难的吧
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努力，奋斗！
10楼2013-01-18 08:46:20
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