| 查看: 4753 | 回复: 7 | |||
| 本帖产生 1 个 博学EPI ，点击这里进行查看 | |||
dcb005金虫 (著名写手)
|
[交流]
求双酶切，分步酶切的具体操作步骤
|
||
| 第一次酶切结束后如何沉淀，在做第二次酶切，第二结束后也是同样的沉淀么？想找详细操作步骤！采用了6个金币奉送，虫友帮忙！ |
回复此楼» 猜你喜欢
梦想
已经有8人回复
-
有多少人是今天查系统知道结果的？
已经有19人回复
-
面上合作单位盖章
已经有9人回复
-
面上函评意见出来了，像什么等级？
已经有17人回复
-
为什么国自然不能直接公布
已经有5人回复
-
学科评审组评审是指会评吗？
已经有4人回复
-
为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难
已经有14人回复
-
小白求助 投论文要求的highlights应该如何写
已经有4人回复
-
麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上）
已经有12人回复
-
怎么看青基中了没有啊
已经有6人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 双酶切很近的酶切位点，总是切不成功，如何解决？
已经有19人回复
- （基因克隆）双酶切结果与目的条带大小不一致，求有经验的人帮帮我。
已经有4人回复
- 用takara的NdeI和KpnI双酶切连接问题，一直连接不成功，求帮忙？
已经有8人回复
- 双酶切
已经有8人回复
- 关于双酶切和通用buffer的问题
已经有4人回复
- Sac1和Xho1的双酶切连接
已经有5人回复
1514132
至尊木虫 (著名写手)
- 博学EPI: 2
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 10220.6
- 散金: 1000
- 红花: 15
- 帖子: 2573
- 在线: 194.1小时
- 虫号: 927225
- 注册: 2009-12-13
- 性别: MM
- 专业: 性传播疾病
2楼2010-01-08 15:53:15
1514132
至尊木虫 (著名写手)
- 博学EPI: 2
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 10220.6
- 散金: 1000
- 红花: 15
- 帖子: 2573
- 在线: 194.1小时
- 虫号: 927225
- 注册: 2009-12-13
- 性别: MM
- 专业: 性传播疾病
dcb005(金币+3):xx 2010-05-28 23:21:49
dcb005(金币+1):xx 2010-05-28 23:23:02
dcb005(金币+1):xx 2010-05-28 23:23:02
|
建议楼主这样做： 在第一次酶切后用胶回收试剂盒或者PCR产物纯化试剂盒将你所要的大小一致的片段回收回来，然后对所回收的产物进行第二次酶切，酶切后用同样的方法姜产物回收回来。建议您用NEB公司的酶，TaKaRa公司的酶有些时候不好使，不稳定。 另外，如果有可以共用Buffer的，也可以试一试，我的经验是双酶切虽然节省时间，但是经常切不开或者酶切的不完全。影响下一步的反应。如果时间允许的话，尽量用分布酶切，这样虽然时间要长一些，但是可以提高效率，防止实验材料的浪费。 最后，提醒楼主一点，分步酶切的时候因为每一步都有少许样品的损失，所以一定要准备充足的样品。一般是正常样品量的1.5倍。 |
3楼2010-01-08 17:34:40
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - 博学EPI: 12
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16299.3
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3659
- 在线: 290.6小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
4楼2010-01-08 18:31:34
j2
木虫 (正式写手)
- 博学EPI: 2
- 应助: 56 (初中生)
- 金币: 3797.8
- 散金: 2
- 红花: 4
- 帖子: 688
- 在线: 108.8小时
- 虫号: 452275
- 注册: 2007-11-05
- 性别: MM
- 专业: 卫生检验
5楼2010-01-08 18:34:37
dcb005
金虫 (著名写手)
- 应助: 28 (小学生)
- 贵宾: 0.005
- 金币: 1108.8
- 散金: 110
- 红花: 2
- 帖子: 1850
- 在线: 103.1小时
- 虫号: 275937
- 注册: 2006-09-02
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
6楼2010-01-10 13:53:54
7楼2010-05-28 10:28:55
8楼2010-05-28 10:30:43
5