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dcb005金虫 (著名写手)
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求双酶切，分步酶切的具体操作步骤
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| 第一次酶切结束后如何沉淀，在做第二次酶切，第二结束后也是同样的沉淀么？想找详细操作步骤！采用了6个金币奉送，虫友帮忙！ |
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5楼2010-01-08 18:34:37
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2楼2010-01-08 15:53:15
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dcb005(金币+3):xx 2010-05-28 23:21:49
dcb005(金币+1):xx 2010-05-28 23:23:02
dcb005(金币+1):xx 2010-05-28 23:23:02
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建议楼主这样做： 在第一次酶切后用胶回收试剂盒或者PCR产物纯化试剂盒将你所要的大小一致的片段回收回来，然后对所回收的产物进行第二次酶切，酶切后用同样的方法姜产物回收回来。建议您用NEB公司的酶，TaKaRa公司的酶有些时候不好使，不稳定。 另外，如果有可以共用Buffer的，也可以试一试，我的经验是双酶切虽然节省时间，但是经常切不开或者酶切的不完全。影响下一步的反应。如果时间允许的话，尽量用分布酶切，这样虽然时间要长一些，但是可以提高效率，防止实验材料的浪费。 最后，提醒楼主一点，分步酶切的时候因为每一步都有少许样品的损失，所以一定要准备充足的样品。一般是正常样品量的1.5倍。 |
3楼2010-01-08 17:34:40
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