| 查看: 4729 | 回复: 7 | |||
| 本帖产生 1 个 博学EPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
dcb005金虫 (著名写手)
|
[交流]
求双酶切，分步酶切的具体操作步骤
|
||
| 第一次酶切结束后如何沉淀，在做第二次酶切，第二结束后也是同样的沉淀么？想找详细操作步骤！采用了6个金币奉送，虫友帮忙！ |
回复此楼» 猜你喜欢
我面上完蛋了
已经有10人回复
-
能否退出参与的面上项目解除限项
已经有24人回复
-
filecode，4个jtjc了
已经有17人回复
-
人气不行了
已经有9人回复
-
没有任何消息-是不是就凉了
已经有6人回复
-
如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》
已经有5人回复
-
2026国自然函评费到账
已经有19人回复
-
建议基金发布提前给出明确的时间点
已经有16人回复
-
今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果
已经有21人回复
-
估计是周四
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 双酶切很近的酶切位点，总是切不成功，如何解决？
已经有19人回复
- （基因克隆）双酶切结果与目的条带大小不一致，求有经验的人帮帮我。
已经有4人回复
- 用takara的NdeI和KpnI双酶切连接问题，一直连接不成功，求帮忙？
已经有8人回复
- 双酶切
已经有8人回复
- 关于双酶切和通用buffer的问题
已经有4人回复
- Sac1和Xho1的双酶切连接
已经有5人回复
1514132
至尊木虫 (著名写手)
- 博学EPI: 2
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 10220.6
- 散金: 1000
- 红花: 15
- 帖子: 2573
- 在线: 194.1小时
- 虫号: 927225
- 注册: 2009-12-13
- 性别: MM
- 专业: 性传播疾病
dcb005(金币+3):xx 2010-05-28 23:21:49
dcb005(金币+1):xx 2010-05-28 23:23:02
dcb005(金币+1):xx 2010-05-28 23:23:02
|
建议楼主这样做： 在第一次酶切后用胶回收试剂盒或者PCR产物纯化试剂盒将你所要的大小一致的片段回收回来，然后对所回收的产物进行第二次酶切，酶切后用同样的方法姜产物回收回来。建议您用NEB公司的酶，TaKaRa公司的酶有些时候不好使，不稳定。 另外，如果有可以共用Buffer的，也可以试一试，我的经验是双酶切虽然节省时间，但是经常切不开或者酶切的不完全。影响下一步的反应。如果时间允许的话，尽量用分布酶切，这样虽然时间要长一些，但是可以提高效率，防止实验材料的浪费。 最后，提醒楼主一点，分步酶切的时候因为每一步都有少许样品的损失，所以一定要准备充足的样品。一般是正常样品量的1.5倍。 |
3楼2010-01-08 17:34:40
1514132
至尊木虫 (著名写手)
- 博学EPI: 2
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 10220.6
- 散金: 1000
- 红花: 15
- 帖子: 2573
- 在线: 194.1小时
- 虫号: 927225
- 注册: 2009-12-13
- 性别: MM
- 专业: 性传播疾病
2楼2010-01-08 15:53:15
j2
木虫 (正式写手)
- 博学EPI: 2
- 应助: 56 (初中生)
- 金币: 3797.8
- 散金: 2
- 红花: 4
- 帖子: 688
- 在线: 108.8小时
- 虫号: 452275
- 注册: 2007-11-05
- 性别: MM
- 专业: 卫生检验
5楼2010-01-08 18:34:37
dcb005
金虫 (著名写手)
- 应助: 28 (小学生)
- 贵宾: 0.005
- 金币: 1108.8
- 散金: 110
- 红花: 2
- 帖子: 1850
- 在线: 103.1小时
- 虫号: 275937
- 注册: 2006-09-02
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
6楼2010-01-10 13:53:54
20