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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
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1121prettycat

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于MTT法吸光度值偏小已有4人参与

目前正在用MTT法测定细胞存活率,步骤是将培养液吸出后,加入200微升MTT,37°孵育3到4个小时,然后加入150微升DMSO,想问一下大家用的检测波长和参考波长都是多少,我目前用的是490nm的检测波长和650nm的测定波长,现在用490nm得到的吸光度值包括对照都不到0.2,大约在0.17左右,650nm检测得到的数据大约都在0.05或者0.06,不知道吸光度值偏小是因为孵育时间不够还是与细胞有关,因为使用别的细胞的时候吸光度值都没有这么小,想问一下吸光度这么小数据能否使用?
还有数据处理的时候是不是应该用各孔在490nm检测时得到的数值-650nm检测时得到的数值?
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chengfangfang

木虫 (正式写手)


1121prettycat(金币+1):谢谢参与
我一般都细胞浓度在50000cell/ml左右,在九十六孔板里加200ul,MTT是10微升5mg/ml孵育四小时,去溶液加DMSO200微升,测吸光度时振板五分钟,测试就行了,滤光片490和465都可,正好是紫外区域,和溶液颜色相符
15楼2010-02-03 16:10:46
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