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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【交流/求助】关于纤维素酶测酶活的问题
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王雨云

金虫 (小有名气)

[交流] 【交流/求助】关于纤维素酶测酶活的问题 已有6人参与

我要测一株真菌的内切葡聚糖酶活力大小，目前遇到的问题是实验组和对照组加DNS煮沸后颜色都很深，对照组是100°煮沸5分钟来灭活后再与实验组一起温育30分钟的方法来测酶活，后来改为：对照组直接加DNS+粗酶液+底物，但这样煮沸后颜色还是很深，看文章有将对照组用NaOH处理后再测酶活，貌似这样处理对照组后颜色就不深了，但不知道是不是由于碱与葡萄糖反应了，加DNS后就不显色了，不一定是强碱使蛋白质变性才导致加DNS后不显色的，不知道有没有人做过这方面的实验，能否解释一下？

[ Last edited by amisking on 2009-12-11 at 22:47 ]
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1楼 2009-11-27 16:21:41
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gj5188

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也遇到过这种情况，关键是你的酶液本身含有一定量的葡萄糖，将酶液透析或过凝胶柱处理
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2楼2009-12-03 21:41:54
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王雨云

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gj5188 at 2009-12-3 21:41:
我也遇到过这种情况，关键是你的酶液本身含有一定量的葡萄糖，将酶液透析或过凝胶柱处理

我直接将发酵液加DNS后煮沸显色，颜色很深，跟加了底物温育之后的颜色都差不多了，不知道是否说明我的这个菌的酶活不高。反正至少可以说明加底物再温育这个过程酶对底物的作用不大。但又觉得葡萄糖的产生应该就是酶的降解作用吧，还真不知道这个该怎么解释了
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3楼2009-12-11 19:51:45
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champin110

新虫 (初入文坛)
说明你发酵液当中有一定量的还原糖呀，你发酵培养基中的碳源加的是什么，照你说的那种情况应该是微生物没有怎么利用培养基中的还原糖。
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知识...
4楼2009-12-24 14:47:33
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王雨云

金虫 (小有名气)
碳源应该是羧甲基纤维素钠吧，这也是底物。主要是该真菌产的酶把羧甲基纤维素钠降解为还原糖，而且发酵液中还原糖的量还会影响真菌产酶的能力
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5楼2010-01-05 15:59:57
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smallcat227

木虫 (著名写手)
★
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楼上说的对，透析处理可以，但比较麻烦，可以把粗酶液稀释后再加，这样影响就小多了
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6楼2010-01-05 16:19:32
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王雨云

金虫 (小有名气)
也许吧，谢谢楼上的回答
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7楼2010-01-16 10:27:23
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85715623

木虫 (正式写手)
发酵培养基成分是一方面因素，可以把对照组加水啊，然后一起反应，煮沸不就解决了吗？
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8楼2010-01-16 10:38:42
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秀才ecust

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
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silicare(金币+3): 谢谢参与 2011-01-22 11:07:49
主要有二种情况：第一，底物可能受到酶的污染，时间长了，没有放入冰箱里保存
第二，是酶液本身含有很高的还原性糖，可以稀释，再测，不然测出来是数据偏小！
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9楼2011-01-22 05:09:44
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aaa6239

木虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
3楼: Originally posted by 王雨云 at 2009-12-11 19:51:45:
我直接将发酵液加DNS后煮沸显色，颜色很深，跟加了底物温育之后的颜色都差不多了，不知道是否说明我的这个菌的酶活不高。反正至少可以说明加底物再温育这个过程酶对底物的作用不大。但又觉得葡萄糖的产生应该就 ...

既然你直接将发酵液跟DNS反应颜色都很深，那就说明对照里面的还原糖来自酶液。想办法去除酶液本身还有的还原糖或者稀释酶液的还原糖。
但是，用稀释的办法去消除对照中糖的影响，同样会稀释酶。如果粗酶液中酶活力不高的话，稀释后会测不出酶活。
我自己曾经就对这问题非常头痛，后来在培养基中干脆就不加糖类诱导物。
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10楼2012-03-10 20:33:58
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