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王雨云

金虫 (小有名气)

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[交流] 【交流/求助】关于纤维素酶测酶活的问题已有6人参与

我要测一株真菌的内切葡聚糖酶活力大小，目前遇到的问题是实验组和对照组加DNS煮沸后颜色都很深，对照组是100°煮沸5分钟来灭活后再与实验组一起温育30分钟的方法来测酶活，后来改为：对照组直接加DNS+粗酶液+底物，但这样煮沸后颜色还是很深，看文章有将对照组用NaOH处理后再测酶活，貌似这样处理对照组后颜色就不深了，但不知道是不是由于碱与葡萄糖反应了，加DNS后就不显色了，不一定是强碱使蛋白质变性才导致加DNS后不显色的，不知道有没有人做过这方面的实验，能否解释一下？

[ Last edited by amisking on 2009-12-11 at 22:47 ]

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1楼 2009-11-27 16:21:41

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aaa6239

木虫 (小有名气)

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引用回帖:

3楼: Originally posted by 王雨云 at 2009-12-11 19:51:45:
我直接将发酵液加DNS后煮沸显色，颜色很深，跟加了底物温育之后的颜色都差不多了，不知道是否说明我的这个菌的酶活不高。反正至少可以说明加底物再温育这个过程酶对底物的作用不大。但又觉得葡萄糖的产生应该就 ...

既然你直接将发酵液跟DNS反应颜色都很深，那就说明对照里面的还原糖来自酶液。想办法去除酶液本身还有的还原糖或者稀释酶液的还原糖。
但是，用稀释的办法去消除对照中糖的影响，同样会稀释酶。如果粗酶液中酶活力不高的话，稀释后会测不出酶活。
我自己曾经就对这问题非常头痛，后来在培养基中干脆就不加糖类诱导物。