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【求助】求助正相柱的使用 已有3人参与
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我想用正相的制备柱分化合物（样品极性低，甲醇不溶，无法用反向柱），但以前没用过，身边的的人也没用过，所以特来请教用过的人， 用之前怎么处理，用正己烷冲柱吗？ 一般要平衡多长时间？ 用完以后用什么冲柱子？ 谢谢  |
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leiopixie
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首先，关于色谱柱的选择问题： “样品极性低，甲醇不溶”，不能只因这一特点就选择正相系统。有些样品的溶解度不只是与极性有关，溶解度的影响因素很复杂，因此先要需要了解清楚样品在什么溶剂里溶解性质好，什么溶剂里不溶，要多尝试一些溶剂，也要又一个浓度说明。对于极性低的概念也应该给予数据说明，用什么TLC条件Rf多少？这些才是指导你选择合适分离体系的依据。 其次，关于色谱柱的养护问题： 正相色谱柱一般来说都比较娇气，使用条件较大多反相色谱柱来说都要苛刻一些，尤其是大部分正相色谱柱都非常怕水！PH也有一定的限制。必须指出的是所有的色谱柱都有使用说明，里面会有色谱柱使用的条件要求以及养护方法。仔细阅读使用说明至关重要，将直接影响到分离度、柱效、重现性、寿命等参数！建议楼主不要冒然下手，要做好充分的理论准备，否则柱子很快就会牺牲。 |
8楼2010-01-21 20:05:11
9楼2010-02-09 14:23:30
shooseal
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正相的柱子除了不能用水外，也不能用甲醇、乙腈和THF（应为这些都是反相中的流动相组成）。 正相流动相的主要组成是正己烷和异丙醇（比例适当调整），在这基础上可以适当添加三氟醋酸、冰醋酸或二甲胺（比例一般都在0.1%左右），添加的这些我认为主要等同于反相中缓冲盐的作用。 还有就是稀释液（Diluent），一般同流动相一样，不过有些情况，如不好溶解时可以适当调整比例，可以用作正相稀释的我只碰到过正己烷，异丙醇和乙醇这三种物质。 还有就是柱子的保养，正相柱一般价格比较昂贵，所以保养尤其要注意，我一般用正己烷-异丙醇（90：10）来清洗和保存，如果柱效变差，可以考虑用纯的异丙醇在低流速的情况下活化多个小时（4-10h），可能会提高柱效的 建议所用试剂都选用HPLC级的（HPLC级的没必要照4楼的建议做，基本没影响） （强烈建议仔细查看说明书，很有用的。） 另外楼主如果上反相只是样品不好溶解的话，那么可以考虑换一下稀释液啊，水、甲醇、乙腈、THF这几种有选择的搭配一下就好了啊，实在不行可以稍微加一些NaOH溶液啊（如10ml中加10ulNaOH是可以的，只要有空白对照就OK了） 以上见解如有错漏，还请见谅 |
10楼2010-02-20 21:14:07
7楼2010-01-13 14:35:16
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