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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 【求助】求助正相柱的使用
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泼皮阿三

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】求助正相柱的使用已有3人参与

我想用正相的制备柱分化合物（样品极性低，甲醇不溶，无法用反向柱），但以前没用过，身边的的人也没用过，所以特来请教用过的人，

用之前怎么处理，用正己烷冲柱吗？
一般要平衡多长时间？
用完以后用什么冲柱子？

谢谢
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1楼2009-11-22 13:31:45
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

leiopixie

木虫 (小有名气)
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opq691(金币+5,VIP+0):很详细哈 ，感谢交流 欢迎常来 1-21 20:21
首先，关于色谱柱的选择问题：
“样品极性低，甲醇不溶”，不能只因这一特点就选择正相系统。有些样品的溶解度不只是与极性有关，溶解度的影响因素很复杂，因此先要需要了解清楚样品在什么溶剂里溶解性质好，什么溶剂里不溶，要多尝试一些溶剂，也要又一个浓度说明。对于极性低的概念也应该给予数据说明，用什么TLC条件Rf多少？这些才是指导你选择合适分离体系的依据。
其次，关于色谱柱的养护问题：
正相色谱柱一般来说都比较娇气，使用条件较大多反相色谱柱来说都要苛刻一些，尤其是大部分正相色谱柱都非常怕水！PH也有一定的限制。必须指出的是所有的色谱柱都有使用说明，里面会有色谱柱使用的条件要求以及养护方法。仔细阅读使用说明至关重要，将直接影响到分离度、柱效、重现性、寿命等参数！建议楼主不要冒然下手，要做好充分的理论准备，否则柱子很快就会牺牲。
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每天一帖，你进步我进步！www.utoauto.com
8楼2010-01-21 20:05:11
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stare

木虫 (小有名气)
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opq691(金币+3):感谢参与讨论 2010-03-03 12:46
opq691(金币+2):追加奖励，欢迎常来专家版交流 2010-03-03 12:47
同意楼上观点，上面专家们说的很详细，很好，
我想从两点说：1、机理上正相柱与反相柱市不同的，反相柱保留极性小的，而正相 柱则保留极性大的物质，所以一定要根据你分析物性质选择你要用的柱子的类型、流动相的种类，根据柱子类型确定你洗脱顺序。
                     2、仔细阅读色谱柱使用说明，这一点很重要！！！
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9楼2010-02-09 14:23:30
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shooseal

木虫 (著名写手)
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opq691(金币+5):感谢参与讨论，欢迎常来专家版交流 2010-03-03 12:47
正相的柱子除了不能用水外，也不能用甲醇、乙腈和THF（应为这些都是反相中的流动相组成）。
正相流动相的主要组成是正己烷和异丙醇（比例适当调整），在这基础上可以适当添加三氟醋酸、冰醋酸或二甲胺（比例一般都在0.1%左右），添加的这些我认为主要等同于反相中缓冲盐的作用。
还有就是稀释液（Diluent），一般同流动相一样，不过有些情况，如不好溶解时可以适当调整比例，可以用作正相稀释的我只碰到过正己烷，异丙醇和乙醇这三种物质。
还有就是柱子的保养，正相柱一般价格比较昂贵，所以保养尤其要注意，我一般用正己烷-异丙醇（90：10）来清洗和保存，如果柱效变差，可以考虑用纯的异丙醇在低流速的情况下活化多个小时（4-10h），可能会提高柱效的
建议所用试剂都选用HPLC级的（HPLC级的没必要照4楼的建议做，基本没影响）
（强烈建议仔细查看说明书，很有用的。）
另外楼主如果上反相只是样品不好溶解的话，那么可以考虑换一下稀释液啊，水、甲醇、乙腈、THF这几种有选择的搭配一下就好了啊，实在不行可以稍微加一些NaOH溶液啊（如10ml中加10ulNaOH是可以的，只要有空白对照就OK了）
以上见解如有错漏，还请见谅
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Never give up，never shirk
10楼2010-02-20 21:14:07
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kls1984

金虫 (初入文坛)
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opq691(金币+3,VIP+0):感谢参与交流，欢迎常来专家版 1-18 15:16
看你的流动相了，正己烷相当于反相的水，如果你用的是异丙醇和正己烷，那要用异丙醇冲柱子。
正向柱要注意的是是否怕水，有的柱子水会缩短柱子寿命的。
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7楼2010-01-13 14:35:16
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naren4545

木虫 (正式写手)
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happy169(金币+2,VIP+0):^_^ 11-22 16:04
正己烷相当于反相的水！
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2楼2009-11-22 15:59:45
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421485277

新虫 (初入文坛)
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opq691(金币+1,VIP+0):新虫奖励，欢迎常来专家版 11-23 20:06
没人知道吗,我也同问?期等答案中!
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3楼2009-11-22 19:53:06
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akosrios

铁杆木虫 (知名作家)
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zxz.1982(金币+2,VIP+0):感谢应助，记得常来，俺第一次在专家版评帖，呵呵 11-23 12:27
opq691(金币+1,VIP+0):专家版交流奖励 11-23 20:07
正向柱分类多，楼主如果买的柱子，应该有详细的说明书啊

如果没有，可以根据柱子的填料，百度一下就能出来，看该填料分析柱的说明就行了
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中华人民共和国公民有言论、出版、集会、结社、游行、示威的自由。---中国人民共和国宪法二章三十五条
4楼2009-11-23 08:09:56
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tangfm08

木虫 (著名写手)
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zxz.1982(金币+2,VIP+0):谢谢 11-23 12:27
opq691(金币+1,VIP+0):专家版交流奖励 11-23 20:07
不清楚你用的是什么柱子，但是正相系统是怕水的，就是说你的流动相（色谱纯）的需要先用分子筛除水；
样品要是有水的话，最好先过无水硫酸钠；
是否梯度洗脱，你自己摸索吧。
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5楼2009-11-23 08:13:25
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泼皮阿三

银虫 (小有名气)
★
zxz.1982(金币+0,VIP+0):可以问问产这个柱子的公司工程师，应用工程师对这些应该熟悉了解的更多一些，祝你好运 11-23 12:28
opq691(金币+1,VIP+0):专家版交流奖励 11-23 20:07
实验室买的是ALLTECH的机器，柱子是里面就有的，allsphere silica  5微米的，我在网上找他的说明书，也没搜到，看来要直接找他们公司了问了。
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6楼2009-11-23 10:05:57
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