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【不合理蛙科研实验干货】柱前衍生UPLC一次跑完20种氨基酸
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| 我选AccQ-Tag Ultra,10 µL上清+70 µL硼酸缓冲液+20 µL衍生剂,55 ℃ 10 min,室温放15 min即可进样。BEH C18 1.7 µm,2.1×100 mm,45 ℃,0.4 mL min⁻¹,A:10 % AccQ-Tag浓液-水,B:乙腈,梯度0-0.54 min 0.1 % B,5 min 9 % B,5.4-7 min 0.1 % B。荧光λex 266 nm,λem 473 nm。经验:血清去蛋白用5 %磺基水杨酸,4 ℃ 14000 g 10 min,否则缬氨酸峰拖尾;衍生完24 h内必须进样,否则色氨酸回收率掉15 %;缓冲液pH>9.2,组氨酸才完全反应;每批带NIST SRM 2389a,17种外标+3种内标,相关系数>0.998,日内RSD<1.5 %,日间<3 %。按此流程,一次15 min跑完,天冬酰胺与谷氨酰胺基线分离,省柱后 ninhydrin 的3 h等待。 |
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