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科研检测交流
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[交流]
【不合理蛙科研实验分享】临界点干燥保真菌孢面细节
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| 我观察青霉孢子,先4 %戊二醛4 ℃过夜,PBS洗3×10 min;后1 %锇酸后固定2 h,梯度乙醇30-50-70-90-100 %各15 min,中间100 %换3次。关键:叔丁醇4 ℃置换3×20 min,避免冰晶。临界点干燥仪预冷10 ℃,CO₂冲洗5次,升温至35 ℃、压力80 bar,保15 min后慢放气,全程90 min。孢面喷铂10 mA 90 s,厚度约8 nm。经验:样品贴铝台后,在真空管路里再抽10 min,可减荷电;加速电压5 kV,工作距离8 mm,spot 3.0,信噪比最好;若见边缘亮带,立刻降电压或喷碳补导。按此流程,孢子表面褶皱纹宽50 nm仍锐利,无塌陷,连续拍50视野无漂移。 |
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