24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 5591  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

jqjs

新虫 (初入文坛)

[交流] Western Blot 磷酸化蛋白测定问题 已有8人参与

WB菜鸟最近做ERK蛋白表达

用的碧云天的Western及IP细胞裂解液(说明说适用于磷酸化蛋白的Western检测)
伯乐半干转膜 恒压20V,25min
5%脱脂奶室温摇床封闭1h
一抗室温摇床1h,4度过夜
HRP标记的二抗室温摇床孵育1小时
TMB显色

结果:ERK蛋白表达有条带
          p-ERK在NC膜上只有预染Marker没有任何条带或是背景

请教WB达人为什么p-ERK会是这样的情况,还有这个问题要怎么解决?
各位大侠赐教呀!!!

[ Last edited by amisking on 2009-10-15 at 22:05 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验 免疫学实验经验

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

314300420

捐助贵宾 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by jqjs at 2009-10-15 20:50:46:
WB菜鸟最近做ERK蛋白表达

用的碧云天的Western及IP细胞裂解液(说明说适用于磷酸化蛋白的Western检测)
伯乐半干转膜 恒压20V,25min
5%脱脂奶室温摇床封闭1h
一抗室温摇床1h,4度过夜
HRP标记的二抗室温摇 ...

磷酸化蛋白封闭和稀释一抗建议用3%BSA,不选择奶粉,如果你的Erk或者内参能出的很好,只有p-Erk不出,可以考虑是一抗的问题,可以加大抗体浓度,或者换抗体
3楼2011-04-11 14:56:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

南湖山下

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我的ERK也很悲剧,总是背景很脏,怎么洗也洗不掉,有高手能指点一下吗
2楼2011-04-11 13:03:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

314300420

捐助贵宾 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 南湖山下 at 2011-04-11 13:03:38:
我的ERK也很悲剧,总是背景很脏,怎么洗也洗不掉,有高手能指点一下吗

目的蛋白条带是否够亮,如果目的条带很亮可以降低抗体浓度试试,如果目的蛋白条带也不够清晰,说明抗体效价不行,可以换抗体试试。Erk可以说是比较好做的蛋白,我做了很多样品的Erk和p-Erk,表达量都很高。

4楼2011-04-11 15:06:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liushang1990

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
呃,制样有没有加磷酸酶抑制剂?最好用新鲜的蛋白样品,并且裂解液里加了磷酸酶抑制剂。
基督耶稣降世,为要拯救罪人。
6楼2013-08-13 17:18:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +11 张zz111 2026-03-27 12/600 2026-04-02 22:47 by JourneyLucky
[考研] 一志愿上海海洋大学083200食品学硕,求调剂,接受其他专业 +6 what张 2026-04-01 7/350 2026-04-02 16:48 by zzsw+
[考研] 085600,材料与化工321分求调剂 +11 大馋小子 2026-03-28 11/550 2026-04-02 15:59 by yunlongyang
[考研] 336求调剂 +6 kiyy 2026-04-01 6/300 2026-04-02 15:51 by Jaylen.
[考研] 一志愿郑大材料工程290求调剂 +20 Youth_ 2026-03-30 20/1000 2026-04-02 14:48 by 5896
[考研] 一志愿北京理工大学本科211材料工程294求调剂 +8 mikasa的围巾 2026-03-28 9/450 2026-04-02 12:09 by ms629
[考研] 354求调剂 +4 lxb598 2026-03-31 5/250 2026-04-02 09:55 by Jaylen.
[考研] 0710生物学,325求调剂 +3 mkkkkkl 2026-04-01 3/150 2026-04-02 09:48 by Jaylen.
[考研] 材料求调剂 +8 呢呢妮妮 2026-04-01 8/400 2026-04-02 07:13 by yjolah
[考研] 275求调剂 +12 waltzh 2026-04-01 12/600 2026-04-01 21:44 by chyhaha
[考研] 070300一志愿211,312分求调剂院校 +14 小黄鸭宝 2026-03-30 14/700 2026-04-01 20:19 by 赖春艳
[考研] 333求调剂 +4 阿科逸 2026-03-31 4/200 2026-04-01 09:11 by jp9609
[考研] 343求调剂 +8 爱羁绊 2026-03-28 8/400 2026-03-31 16:12 by 不吃魚的貓
[考研] 本科211生物医学工程085409求调剂339分 +7 里子木yy 2026-03-29 7/350 2026-03-31 14:35 by fmesaito
[考研] 286求调剂 +5 丢掉懒惰 2026-03-27 8/400 2026-03-31 11:27 by Delta2012
[考研] 293分求调剂,外语为俄语 +5 加一一九 2026-03-31 5/250 2026-03-31 09:39 by zhshch
[考研] 一志愿大连理工大学材料求调剂 +6 Gymno 2026-03-30 6/300 2026-03-31 07:26 by 无际的草原
[考研] 哈尔滨工业大学材料与化工专硕378求调剂 +3 塔比乌斯 2026-03-30 3/150 2026-03-30 22:55 by 无际的草原
[考研] 279求调剂 +12 j的立方 2026-03-29 12/600 2026-03-30 20:30 by dick_runner
[考研] 343求调剂 +6 爱羁绊 2026-03-29 6/300 2026-03-29 12:00 by 无际的草原
信息提示
请填处理意见