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hellohuo金虫 (小有名气)
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[求助]
植物基因敲低表达，用CRISPR还是用RNAi？ 已有2人参与
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| 最近想要做植物内某个基因的沉默，一直纠结于用Crispr，还是用传统的RNAi技术，我的目的想要看该基因敲低后的相关生理状态，并不一定非要敲除，担心彻底敲除某个基因会引起其他生理反应，而不是我预期的生理现象。因此，想求教各位大神，这两个技术手段的优缺点，针对我的实验目的，有没有大神可以给点建议？谢谢！ |
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【答案】应助回帖
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hellohuo: 金币+15, ★★★很有帮助, 感谢您的回答，明白了很多！ 2021-02-20 09:36:55
hellohuo: 金币+15, ★★★很有帮助, 感谢您的回答，明白了很多！ 2021-02-20 09:36:55
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1：研究对象是拟南芥？是单子叶植物还是双子叶植物？载体不同侵染物种不同，但无论是什么植物基本上CRISPR都需要构建双元载体，U6启动子的中间载体，及连接Cas9的表达载体（pYAO-AtU6-Cas9侵染拟南芥，而pCA1300-OsU6-Cas9适合水稻） 2：理论上讲Cas9会切割基因组DNA双链，再设计sgRNA靶点NGG，的N位点，DNA利用修复产生错配，造成替换，串码，提前终止，再侵染完成后的T1代就能拿到纯合株系！注意，此时的纯合株系里含有Cas9融合蛋白，需于野生型杂交将Cas9分离筛掉 3: 若是你的基因功能在植物生长发育阶段起到了重要功能，若是缺失了，肯定会有表型的（包括杂合） |
9楼2020-12-12 13:47:51
hellohuo2楼2020-11-28 13:31:27
hellohuo
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1409.1
- 红花: 3
- 帖子: 144
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- 虫号: 1693027
- 注册: 2012-03-15
- 性别: MM
- 专业: 植物生理与生化
3楼2020-12-02 09:14:29
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大家还选择CRISPR进行基因功能研究，，最主要的还是该技术可以实现基因敲除，更确定地是突变体材料的定制，理论上可以实现任意位点的核苷酸序列的改变（编辑），比如特定的编码区、结构域、顺势作用元件、内含子等。其次，CRISPR技术获得材料最后是可以不含外源T-DNA的，意味着在生产上应用的潜力加大，同时更重要的是可以在此基础上再次进行其他基因的敲除，实现多基因敲除（当合理设计携带多个sgRNA也能轻易地进行多基因敲除）。由于CRIPSR的高特异性，对于相似度极高的同源基因也能很好地实现靶基因的敲除。 选择CRISPR还是RNAi，关键取决于各自的试验内容及目的吧，毕竟这俩只是单纯的技术而已，各有有缺，合理使用即可。 你之前有相关的实验数据表明该基因敲除对发育有严重影响吗？ |
4楼2020-12-02 12:01:36
