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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 重组毕赤酵母菌落pcr条带不正确
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贪恋尘世

新虫 (正式写手)

[交流] 重组毕赤酵母菌落pcr条带不正确

前段时间电转质粒到毕赤酵母GS115后，平板上长了很多酵母菌，但是用目的基因特异性引物菌落pcr有条带，但是用载体两端通用引物只p出500bp的空载体片段，特别诡异，现在不知道我的质粒到底有没有转入酵母中，请各位大神指教，电泳图如下所示，左边是用目的基因特异性引物p的条带，大小也正确，右边是载体通用引物，只有500bp的空载片段。

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1楼 2017-11-26 16:55:22
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飞翔之翼98

至尊木虫 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
目的基因引物有两条和一条的可能，根据你筛选的转化子

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8楼2017-11-26 23:17:44
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普通回帖

贪恋尘世

新虫 (正式写手)
请各位指教
重组毕赤酵母菌落pcr条带不正确



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2楼2017-11-26 16:55:53
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贪恋尘世

新虫 (正式写手)
求助啊

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3楼2017-11-26 17:02:36
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yxk123321

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你设置一个对照就明白了。

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4楼2017-11-26 17:08:38
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贪恋尘世

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yxk123321 at 2017-11-26 17:08:38
你设置一个对照就明白了。

请问设置什么对照，是空质粒吗

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5楼2017-11-26 17:09:53
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yxk123321

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 贪恋尘世 at 2017-11-26 17:09:53
请问设置什么对照，是空质粒吗
...

你的通用引物是哪个？我认为应该设置直接P  GS115菌做对照。

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6楼2017-11-26 17:17:04
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贪恋尘世

新虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yxk123321 at 2017-11-26 17:17:04
你的通用引物是哪个？我认为应该设置直接P  GS115菌做对照。
...

通用引物是载体引物，直接p菌的结果能说明什么，麻烦您指教一下

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7楼2017-11-26 17:18:28
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贪恋尘世

新虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 飞翔之翼98 at 2017-11-26 23:17:44
目的基因引物有两条和一条的可能，根据你筛选的转化子

可是我只有一条啊

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9楼2017-11-27 10:19:47
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贪恋尘世

新虫 (正式写手)
顶帖

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10楼2017-11-27 12:58:12
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胖栋

至尊木虫 (文坛精英)
★
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
祝楼主好运哦
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12楼2017-11-27 14:26:21
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贪恋尘世

新虫 (正式写手)
求各位大神帮忙解决问题

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13楼2017-11-27 14:47:15
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贪恋尘世

新虫 (正式写手)
求解答

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15楼2017-11-27 19:39:15
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贪恋尘世

新虫 (正式写手)
有人吗

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25楼2017-11-27 21:39:32
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贪恋尘世

新虫 (正式写手)
有人解答一下吗

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31楼2017-11-28 10:07:09
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菜头Q

铜虫 (初入文坛)
★
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
我也刚开始做酵母转化。说说我自己的理解吧，不一定对，咱们互相交流一下。首先就是转化子做PCR鉴定，我觉得做菌落PCR不如做基因组PCR，酵母的外壁结构比大肠杆菌复杂得多，简单的煮沸很难裂解菌体，其他网上的方法我们试了效果也不理想，你的结果也许说明PCR的模板本身就是假阳性。其次就是你可以试试用一个目的产物扩增引物和一个载体测序引物作为PCR的引物对。
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34楼2017-11-28 15:13:25
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贪恋尘世

新虫 (正式写手)
引用回帖:
34楼: Originally posted by 菜头Q at 2017-11-28 15:13:25
我也刚开始做酵母转化。说说我自己的理解吧，不一定对，咱们互相交流一下。首先就是转化子做PCR鉴定，我觉得做菌落PCR不如做基因组PCR，酵母的外壁结构比大肠杆菌复杂得多，简单的煮沸很难裂解菌体，其他网上的方法 ...

好的，谢谢您，我打算做一端载体引物，一端目的基因引物试试

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35楼2017-11-28 16:27:52
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匿名

用户注销 (著名写手)
★
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
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36楼2017-11-28 22:11:19
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贪恋尘世

新虫 (正式写手)
求助

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38楼2017-11-29 09:47:05
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贪恋尘世

新虫 (正式写手)
引用回帖:
36楼: Originally posted by kentyu at 2017-11-28 22:11:19
是先把目的基因和载体连接后转化到毕赤酵母里吗？一般做菌落验证的时候用载体上的引物能检测目的基因和载体有没有连接上

已经检测过，目的基因和载体是连上的，确定后，我才继续转入酵母的

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39楼2017-11-29 09:47:57
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紫月清风2012

新虫 (初入文坛)
★
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
麻烦问下，你的毕赤酵母最高培养温度多少就会死亡，不再生长。
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41楼2017-11-29 16:00:00
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youngen11楼
2017-11-27 13:40   回复  
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slytjiaofei14楼
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奶奶的心意16楼
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麻将老板娘17楼
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dongmings18楼
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姚站长的19楼
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军哥的人20楼
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敏敏的妈21楼
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塞北先生22楼
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敏敏的爸23楼
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Lucyjuly72924楼
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虫虫很孤独26楼
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hydzp27楼
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远方的游子61228楼
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syhorchid29楼
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nono200930楼
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