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贪恋尘世

新虫 (正式写手)

应助: 1 (幼儿园)
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虫号: 4254595

[交流] 重组毕赤酵母菌落pcr条带不正确

前段时间电转质粒到毕赤酵母GS115后，平板上长了很多酵母菌，但是用目的基因特异性引物菌落pcr有条带，但是用载体两端通用引物只p出500bp的空载体片段，特别诡异，现在不知道我的质粒到底有没有转入酵母中，请各位大神指教，电泳图如下所示，左边是用目的基因特异性引物p的条带，大小也正确，右边是载体通用引物，只有500bp的空载片段。

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1楼2017-11-26 16:55:22

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菜头Q

铜虫 (初入文坛)

应助: 7 (幼儿园)
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虫号: 2874799

★
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与

我也刚开始做酵母转化。说说我自己的理解吧，不一定对，咱们互相交流一下。首先就是转化子做PCR鉴定，我觉得做菌落PCR不如做基因组PCR，酵母的外壁结构比大肠杆菌复杂得多，简单的煮沸很难裂解菌体，其他网上的方法我们试了效果也不理想，你的结果也许说明PCR的模板本身就是假阳性。其次就是你可以试试用一个目的产物扩增引物和一个载体测序引物作为PCR的引物对。