应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 重组毕赤酵母菌落pcr条带不正确
791/2返回列表12下一页
查看: 5574  |  回复: 78
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

贪恋尘世

新虫 (正式写手)

[交流] 重组毕赤酵母菌落pcr条带不正确

前段时间电转质粒到毕赤酵母GS115后，平板上长了很多酵母菌，但是用目的基因特异性引物菌落pcr有条带，但是用载体两端通用引物只p出500bp的空载体片段，特别诡异，现在不知道我的质粒到底有没有转入酵母中，请各位大神指教，电泳图如下所示，左边是用目的基因特异性引物p的条带，大小也正确，右边是载体通用引物，只有500bp的空载片段。

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2017-11-26 16:55:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

飞翔之翼98

至尊木虫 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
目的基因引物有两条和一条的可能，根据你筛选的转化子

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2017-11-26 23:17:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

贪恋尘世

新虫 (正式写手)
请各位指教
重组毕赤酵母菌落pcr条带不正确



发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
2楼2017-11-26 16:55:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贪恋尘世

新虫 (正式写手)
求助啊

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
3楼2017-11-26 17:02:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yxk123321

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你设置一个对照就明白了。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2017-11-26 17:08:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贪恋尘世

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yxk123321 at 2017-11-26 17:08:38
你设置一个对照就明白了。

请问设置什么对照，是空质粒吗

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2017-11-26 17:09:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yxk123321

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 贪恋尘世 at 2017-11-26 17:09:53
请问设置什么对照，是空质粒吗
...

你的通用引物是哪个？我认为应该设置直接P  GS115菌做对照。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2017-11-26 17:17:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贪恋尘世

新虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yxk123321 at 2017-11-26 17:17:04
你的通用引物是哪个？我认为应该设置直接P  GS115菌做对照。
...

通用引物是载体引物，直接p菌的结果能说明什么，麻烦您指教一下

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
7楼2017-11-26 17:18:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贪恋尘世

新虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 飞翔之翼98 at 2017-11-26 23:17:44
目的基因引物有两条和一条的可能，根据你筛选的转化子

可是我只有一条啊

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
9楼2017-11-27 10:19:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贪恋尘世

新虫 (正式写手)
顶帖

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
10楼2017-11-27 12:58:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胖栋

至尊木虫 (文坛精英)
★
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
祝楼主好运哦
回复此楼
12楼2017-11-27 14:26:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贪恋尘世

新虫 (正式写手)
求各位大神帮忙解决问题

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
13楼2017-11-27 14:47:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贪恋尘世

新虫 (正式写手)
求解答

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
15楼2017-11-27 19:39:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贪恋尘世

新虫 (正式写手)
有人吗

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
25楼2017-11-27 21:39:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贪恋尘世

新虫 (正式写手)
有人解答一下吗

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
31楼2017-11-28 10:07:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

菜头Q

铜虫 (初入文坛)
★
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
我也刚开始做酵母转化。说说我自己的理解吧，不一定对，咱们互相交流一下。首先就是转化子做PCR鉴定，我觉得做菌落PCR不如做基因组PCR，酵母的外壁结构比大肠杆菌复杂得多，简单的煮沸很难裂解菌体，其他网上的方法我们试了效果也不理想，你的结果也许说明PCR的模板本身就是假阳性。其次就是你可以试试用一个目的产物扩增引物和一个载体测序引物作为PCR的引物对。
赞一下 回复此楼
34楼2017-11-28 15:13:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贪恋尘世

新虫 (正式写手)
引用回帖:
34楼: Originally posted by 菜头Q at 2017-11-28 15:13:25
我也刚开始做酵母转化。说说我自己的理解吧，不一定对，咱们互相交流一下。首先就是转化子做PCR鉴定，我觉得做菌落PCR不如做基因组PCR，酵母的外壁结构比大肠杆菌复杂得多，简单的煮沸很难裂解菌体，其他网上的方法 ...

好的，谢谢您，我打算做一端载体引物，一端目的基因引物试试

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
35楼2017-11-28 16:27:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (著名写手)
★
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
本帖仅楼主可见
赞一下
36楼2017-11-28 22:11:19
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

贪恋尘世

新虫 (正式写手)
求助

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
38楼2017-11-29 09:47:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贪恋尘世

新虫 (正式写手)
引用回帖:
36楼: Originally posted by kentyu at 2017-11-28 22:11:19
是先把目的基因和载体连接后转化到毕赤酵母里吗？一般做菌落验证的时候用载体上的引物能检测目的基因和载体有没有连接上

已经检测过，目的基因和载体是连上的，确定后，我才继续转入酵母的

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
39楼2017-11-29 09:47:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

紫月清风2012

新虫 (初入文坛)
★
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
麻烦问下，你的毕赤酵母最高培养温度多少就会死亡，不再生长。
赞一下 回复此楼
41楼2017-11-29 16:00:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
youngen11楼
2017-11-27 13:40   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
slytjiaofei14楼
2017-11-27 15:00   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
奶奶的心意16楼
2017-11-27 19:50   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
麻将老板娘17楼
2017-11-27 20:11   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
dongmings18楼
2017-11-27 20:14   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫IOS客户端
姚站长的19楼
2017-11-27 20:21   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
军哥的人20楼
2017-11-27 20:35   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
敏敏的妈21楼
2017-11-27 20:49   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
塞北先生22楼
2017-11-27 21:02   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
敏敏的爸23楼
2017-11-27 21:07   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
Lucyjuly72924楼
2017-11-27 21:22   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
虫虫很孤独26楼
2017-11-27 21:47   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
hydzp27楼
2017-11-27 21:52   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
祝福 发自小木虫IOS客户端
远方的游子61228楼
2017-11-27 22:02   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
syhorchid29楼
2017-11-27 23:46   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
nono200930楼
2017-11-27 23:56   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
。 发自小木虫Android客户端
yaoyao14532楼
2017-11-28 14:45   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
hongyingwu33楼
2017-11-28 14:55   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
sz_kebaoyuan37楼
2017-11-28 23:26   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
绽放201440楼
2017-11-29 10:53   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
youngen42楼
2017-11-29 16:34   回复  
zhaoyan197843楼
2017-11-29 17:13   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
雅虎跌44楼
2017-11-30 10:55   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
mergn65245楼
2017-11-30 11:05   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
shenrenren46楼
2017-11-30 11:30   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
雾霾天201347楼
2017-11-30 11:30   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
fmtac3848楼
2017-11-30 11:30   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
revhk5649楼
2017-11-30 12:09   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
qhtbwfc1250楼
2017-11-30 12:43   回复  
贪恋尘世(金币+1): 谢谢参与
顶
相关版块跳转 我要订阅楼主 贪恋尘世 的主题更新
791/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭