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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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儒雅的爱席

新虫 (初入文坛)

[求助] ABI 7500 荧光定量扩增曲线 已有2人参与

qPCR 我扩增的溶解曲线非S形，不知道是什么原因？求助！谢谢！！！

ABI 7500  荧光定量扩增曲线
图片jpg.png
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1楼 2017-08-10 14:34:55
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-08-11 12:43:47
1. 建议跑一下电泳看一下目的条带亮度和完整性，这样的情况一般浓度是比较低，扩增效率低的结果，如果是这样的话建议增加产物浓度，减少引物量（如0.2uM each），可以增加引物特异性，当然检查试剂盒的情况，是否按照说明书去做，或者换一个扩增效率更高的试剂盒
2.如果量少，产物里阻碍物比较多，什么曲线都会产生，前面几张图峰值不是很高的那几个只是将原始的曲线放大了而已，相较于正常的溶解曲线可以忽略不计
3.检查模板来源，提取的时候浓度、完整性、污染情况。
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及时行乐，人生不留遗憾！
2楼2017-08-10 16:41:00
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极北小白熊

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-11 12:44:03
就没有进入对数期，扩增效率有问题，优化体系吧
赞一下 回复此楼
3楼2017-08-10 20:43:43
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冷雁孤旅

木虫 (著名写手)
没有进入平台期  你看看模板浓度和扩增效率 设计引物一定要看看扩增效率

发自小木虫IOS客户端
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生命不息奋斗不止
4楼2017-08-12 07:35:36
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儒雅的爱席

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-08-10 16:41:00
1. 建议跑一下电泳看一下目的条带亮度和完整性，这样的情况一般浓度是比较低，扩增效率低的结果，如果是这样的话建议增加产物浓度，减少引物量（如0.2uM each），可以增加引物特异性，当然检查试剂盒的情况，是否按 ...

嗯，好的，谢谢，我已经找到了问题所在。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2017-08-12 07:41:04
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儒雅的爱席

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 极北小白熊 at 2017-08-10 20:43:43
就没有进入对数期，扩增效率有问题，优化体系吧

谢谢，我已经找到了原因。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2017-08-12 07:42:06
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儒雅的爱席

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 冷雁孤旅 at 2017-08-12 07:35:36
没有进入平台期  你看看模板浓度和扩增效率 设计引物一定要看看扩增效率

好的，谢谢。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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7楼2017-08-12 07:44:28
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