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儒雅的爱席

新虫 (初入文坛)

[求助] ABI 7500 荧光定量扩增曲线 已有2人参与

qPCR 我扩增的溶解曲线非S形,不知道是什么原因?求助!谢谢!!!

ABI 7500  荧光定量扩增曲线
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儒雅的爱席

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 极北小白熊 at 2017-08-10 20:43:43
就没有进入对数期,扩增效率有问题,优化体系吧

谢谢,我已经找到了原因。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
6楼2017-08-12 07:42:06
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查看全部 7 个回答

晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-08-11 12:43:47
1. 建议跑一下电泳看一下目的条带亮度和完整性,这样的情况一般浓度是比较低,扩增效率低的结果,如果是这样的话建议增加产物浓度,减少引物量(如0.2uM each),可以增加引物特异性,当然检查试剂盒的情况,是否按照说明书去做,或者换一个扩增效率更高的试剂盒
2.如果量少,产物里阻碍物比较多,什么曲线都会产生,前面几张图峰值不是很高的那几个只是将原始的曲线放大了而已,相较于正常的溶解曲线可以忽略不计
3.检查模板来源,提取的时候浓度、完整性、污染情况。
及时行乐,人生不留遗憾!
2楼2017-08-10 16:41:00
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极北小白熊

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-11 12:44:03
就没有进入对数期,扩增效率有问题,优化体系吧
3楼2017-08-10 20:43:43
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冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

没有进入平台期  你看看模板浓度和扩增效率 设计引物一定要看看扩增效率

发自小木虫IOS客户端
生命不息奋斗不止
4楼2017-08-12 07:35:36
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