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yuevis

铜虫 (小有名气)

[求助] 芽孢杆菌的同源重组 已有1人参与

我想做多黏芽孢杆菌的同源重组,敲除以及交换基因片段,应该用什么质粒?文献里有的质粒太贵,有的都没有卖……请问这方面的大神一般用什么质粒?

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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1、pET28a。

2、PET-28a表达载体具有T7启动子及lac调控子,需要较高的IPTG起始浓度才能启动有效表达,可使用1mM-2mM,而大家平时使用的IPTG浓度一般为0.1mM,所以建议大家提高IPTG的浓度。而加入IPTG的时机,一般要求菌液OD600达到0.3-0.5时再加入,因为IPTG对于细菌具有较高的毒性,加入过早,会致使细菌生长非常缓慢,甚至死亡。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

及时行乐,人生不留遗憾!
2楼2017-07-17 23:22:30
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yuevis

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-07-17 23:22:30
1、pET28a。

2、PET-28a表达载体具有T7启动子及lac调控子,需要较高的IPTG起始浓度才能启动有效表达,可使用1mM-2mM,而大家平时使用的IPTG浓度一般为0.1mM,所以建议大家提高IPTG的浓度。而加入IPTG的时机,一般 ...

感谢您读完回复,请问您有这个相关的文献吗?

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3楼2017-07-18 00:03:37
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yuevis

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-07-17 23:22:30
1、pET28a。

2、PET-28a表达载体具有T7启动子及lac调控子,需要较高的IPTG起始浓度才能启动有效表达,可使用1mM-2mM,而大家平时使用的IPTG浓度一般为0.1mM,所以建议大家提高IPTG的浓度。而加入IPTG的时机,一般 ...

感谢您的回复,请问您有这个相关的文献吗?

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4楼2017-07-18 00:04:36
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yuevis at 2017-07-18 00:03:37
感谢您读完回复,请问您有这个相关的文献吗?
...

pET28a可以用来做E. coli表达蛋白,应该不能用于芽孢杆菌的基因敲除

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做一个阳光、开朗的小和尚
5楼2017-07-18 12:37:02
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yuevis

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zhaozhibozhi at 2017-07-18 12:37:02
pET28a可以用来做E. coli表达蛋白,应该不能用于芽孢杆菌的基因敲除
...

请问,我在文献里看过两三个用于芽孢杆菌敲除的质粒,要不太贵,要不就没货。

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6楼2017-07-18 13:02:17
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yuevis

铜虫 (小有名气)

有人有相关的质粒,或者知道吗

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7楼2017-07-18 16:10:02
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