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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 芽孢杆菌的同源重组
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yuevis

铜虫 (小有名气)

[求助] 芽孢杆菌的同源重组 已有1人参与

我想做多黏芽孢杆菌的同源重组，敲除以及交换基因片段，应该用什么质粒?文献里有的质粒太贵，有的都没有卖……请问这方面的大神一般用什么质粒?

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1楼 2017-07-17 14:05:10
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1、pET28a。

2、PET-28a表达载体具有T7启动子及lac调控子，需要较高的IPTG起始浓度才能启动有效表达，可使用1mM-2mM，而大家平时使用的IPTG浓度一般为0.1mM，所以建议大家提高IPTG的浓度。而加入IPTG的时机，一般要求菌液OD600达到0.3-0.5时再加入，因为IPTG对于细菌具有较高的毒性，加入过早，会致使细菌生长非常缓慢，甚至死亡。
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yuevis
及时行乐，人生不留遗憾！
2楼2017-07-17 23:22:30
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yuevis

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-07-17 23:22:30
1、pET28a。

2、PET-28a表达载体具有T7启动子及lac调控子，需要较高的IPTG起始浓度才能启动有效表达，可使用1mM-2mM，而大家平时使用的IPTG浓度一般为0.1mM，所以建议大家提高IPTG的浓度。而加入IPTG的时机，一般 ...

感谢您读完回复，请问您有这个相关的文献吗?

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3楼2017-07-18 00:03:37
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yuevis

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-07-17 23:22:30
1、pET28a。

2、PET-28a表达载体具有T7启动子及lac调控子，需要较高的IPTG起始浓度才能启动有效表达，可使用1mM-2mM，而大家平时使用的IPTG浓度一般为0.1mM，所以建议大家提高IPTG的浓度。而加入IPTG的时机，一般 ...

感谢您的回复，请问您有这个相关的文献吗?

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4楼2017-07-18 00:04:36
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yuevis at 2017-07-18 00:03:37
感谢您读完回复，请问您有这个相关的文献吗?
...

pET28a可以用来做E. coli表达蛋白，应该不能用于芽孢杆菌的基因敲除

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做一个阳光、开朗的小和尚
5楼2017-07-18 12:37:02
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yuevis

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhaozhibozhi at 2017-07-18 12:37:02
pET28a可以用来做E. coli表达蛋白，应该不能用于芽孢杆菌的基因敲除
...

请问，我在文献里看过两三个用于芽孢杆菌敲除的质粒，要不太贵，要不就没货。

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6楼2017-07-18 13:02:17
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yuevis

铜虫 (小有名气)
有人有相关的质粒，或者知道吗

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7楼2017-07-18 16:10:02
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