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yuevis

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[求助] 芽孢杆菌的同源重组已有1人参与

我想做多黏芽孢杆菌的同源重组，敲除以及交换基因片段，应该用什么质粒?文献里有的质粒太贵，有的都没有卖……请问这方面的大神一般用什么质粒?

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1楼 2017-07-17 14:05:10

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晋鹏

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

1、pET28a。

2、PET-28a表达载体具有T7启动子及lac调控子，需要较高的IPTG起始浓度才能启动有效表达，可使用1mM-2mM，而大家平时使用的IPTG浓度一般为0.1mM，所以建议大家提高IPTG的浓度。而加入IPTG的时机，一般要求菌液OD600达到0.3-0.5时再加入，因为IPTG对于细菌具有较高的毒性，加入过早，会致使细菌生长非常缓慢，甚至死亡。

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yuevis

及时行乐，人生不留遗憾！

2楼2017-07-17 23:22:30

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yuevis

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-07-17 23:22:30
1、pET28a。

2、PET-28a表达载体具有T7启动子及lac调控子，需要较高的IPTG起始浓度才能启动有效表达，可使用1mM-2mM，而大家平时使用的IPTG浓度一般为0.1mM，所以建议大家提高IPTG的浓度。而加入IPTG的时机，一般 ...

感谢您读完回复，请问您有这个相关的文献吗?

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3楼2017-07-18 00:03:37

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