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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » pKD46质粒的电转
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love西瓜酱

新虫 (初入文坛)

[求助] pKD46质粒的电转 已有2人参与

大家平时做大肠杆菌的电转时，用1mm电击杯的参数（电压、电击时间）设置多少？
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1楼 2017-06-26 16:27:18
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莫落

木虫 (正式写手)
用10%的甘油悬浮细菌，会有少部分死亡

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4楼2017-06-26 17:37:45
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普通回帖

莫落

木虫 (正式写手)
1.7K 5ms

发自小木虫Android客户端
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2楼2017-06-26 16:38:27
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love西瓜酱

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 莫落 at 2017-06-26 16:38:27
1.7K 5ms

请问 你是做的JM109这种模式菌株还是K12这样的普通原始大肠杆菌？我刚刚试了用1.7KV，5ms电转，电击仪显示这个电压下，至少30ms，然后我就照机器说的电了。。离心后发现能离出菌体，说明至少菌体没有被电死，还不知道电转结果怎么样呢。
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3楼2017-06-26 17:33:29
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soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
大肠杆菌电转，比较通用的参数是 2000V 25μF 200Ω
前两个月摸过一轮条件，用的也是1mm的电转杯，发现就这个条件的阳性克隆最多，剩余的对应参数是 1次脉冲，实际放电时间持续4.2-4.3ms之间(跟机器和缓冲液以及杯子有关)
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5楼2017-06-27 06:28:11
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bainaling

铁杆木虫 (正式写手)
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6楼2017-06-27 09:55:48
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love西瓜酱

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by soarrow at 2017-06-27 06:28:11
大肠杆菌电转，比较通用的参数是 2000V 25μF 200Ω
前两个月摸过一轮条件，用的也是1mm的电转杯，发现就这个条件的阳性克隆最多，剩余的对应参数是 1次脉冲，实际放电时间持续4.2-4.3ms之间(跟机器和缓冲液以及杯 ...

好的，谢谢
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7楼2017-06-27 10:14:41
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匿名

用户注销 (正式写手)
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8楼2017-07-12 15:07:47
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20081118129

新虫 (著名写手)

Drake
引用回帖:
5楼: Originally posted by soarrow at 2017-06-27 06:28:11
大肠杆菌电转，比较通用的参数是 2000V 25μF 200Ω
前两个月摸过一轮条件，用的也是1mm的电转杯，发现就这个条件的阳性克隆最多，剩余的对应参数是 1次脉冲，实际放电时间持续4.2-4.3ms之间(跟机器和缓冲液以及杯 ...

你好，你做pKD46的转化做成功了吗？我想向你请教一下，谢谢！
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9楼2018-06-12 16:31:17
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soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党
引用回帖:
9楼: Originally posted by 20081118129 at 2018-06-12 16:31:17
你好，你做pKD46的转化做成功了吗？我想向你请教一下，谢谢！...

我用的是pKD46的衍生质粒，这个转化当然是成功了。
这个转化没有什么难度，优化的话多测试几组条件就好了。
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10楼2018-06-13 05:00:32
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