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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 连接转化一直没结果
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木先生kkkk

新虫 (初入文坛)

[求助] 连接转化一直没结果

请教一下各位，最近在做克隆，连接用TAKARA 19T载体连，体系为T载体1微升，目的基因是2微升（片段在750bp左右），连2个半小时。转化用5微升加到50微升的感受态细胞，涂布LB培养基上过夜没长菌落出来。
是不是哪里出了问题，之前这样做就没有问题！

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1楼 2017-06-10 09:37:35
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

前行的璐

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 木先生kkkk at 2017-06-10 09:58:27
有木有人

你好，有没有做对照，排除是不是感受态的问题？
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3楼2017-06-10 11:08:34
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cclh

新虫 (初入文坛)
是不是时间短了，我的跟你差不多，会连过夜，还有温度

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4楼2017-06-11 19:10:45
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perfect1020

新虫 (初入文坛)
我们一般做都是4度过夜

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7楼2017-06-13 00:24:51
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木先生kkkk

新虫 (初入文坛)
有木有人

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2楼2017-06-10 09:58:27
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赵英0709

新虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-12 23:03:19
你好，你有没有加连接的酶和buffer，我都是16摄氏度过夜连接，而且我克隆的基因近2000，是可以连接上去的，我也用的takara的

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5楼2017-06-12 17:48:31
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cai3110274

木虫 (职业作家)
16度过夜

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夫天地者万物之逆旅
6楼2017-06-12 19:25:03
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030Selma

金虫 (正式写手)
目的基因片段末端有A吗？

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8楼2017-06-13 05:07:59
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fengshen2005

银虫 (正式写手)
目的基因浓度低

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9楼2017-06-13 06:34:44
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傲娇的小马尾

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by fengshen2005 at 2017-06-13 06:34:44
目的基因浓度低

想请教您，如果目的基因浓度低，怎样提高连接成功率？
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10楼2017-07-26 18:15:03
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