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木先生kkkk

新虫 (初入文坛)

[求助] 连接转化一直没结果

请教一下各位,最近在做克隆,连接用TAKARA 19T载体连,体系为T载体1微升,目的基因是2微升(片段在750bp左右),连2个半小时。转化用5微升加到50微升的感受态细胞,涂布LB培养基上过夜没长菌落出来。
是不是哪里出了问题,之前这样做就没有问题!

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前行的璐

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 木先生kkkk at 2017-06-10 09:58:27
有木有人

你好,有没有做对照,排除是不是感受态的问题?
3楼2017-06-10 11:08:34
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cclh

新虫 (初入文坛)

是不是时间短了,我的跟你差不多,会连过夜,还有温度

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4楼2017-06-11 19:10:45
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perfect1020

新虫 (初入文坛)

7楼2017-06-13 00:24:51
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普通回帖

木先生kkkk

新虫 (初入文坛)

2楼2017-06-10 09:58:27
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赵英0709

新虫 (小有名气)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-12 23:03:19
你好,你有没有加连接的酶和buffer,我都是16摄氏度过夜连接,而且我克隆的基因近2000,是可以连接上去的,我也用的takara的

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5楼2017-06-12 17:48:31
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cai3110274

木虫 (职业作家)

夫天地者万物之逆旅
6楼2017-06-12 19:25:03
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030Selma

金虫 (正式写手)

目的基因片段末端有A吗?

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8楼2017-06-13 05:07:59
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fengshen2005

银虫 (正式写手)

9楼2017-06-13 06:34:44
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傲娇的小马尾

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by fengshen2005 at 2017-06-13 06:34:44
目的基因浓度低

想请教您,如果目的基因浓度低,怎样提高连接成功率?
10楼2017-07-26 18:15:03
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