| 查看: 2864 | 回复: 14 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
T_Stranger新虫 (初入文坛)
|
[交流]
表达载体与目的基因连接不上
|
||
|
胶回收的表达载体pET28与目的基因neua，连接体系为：pET28:1μ，neua:4μ，solution Ⅰ：5μ，过夜连接，在卡那抗性的平板里面长出来部分，全部菌P没有条带，自己分析应该是抗性浓度过低，使得原始感受态长出来部分，可是为什么菌P一个目的条带都没有，已经做了五六次菌p都是这样，有大神能分析一下吗 发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有262人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 原核表达始终构建载体不成功！！！！
已经有18人回复
- 关于构建pET28a载体转化后IPTG诱导跑SDS-PAGE胶问题。
已经有25人回复
- 转化BL21(DE32),涂含氨苄平板，37度培养，菌长的特别少，几个。。。求大神分析原因
已经有16人回复
- 蛋白产量低，欲更换载体进行表达优化，请教~
已经有16人回复
- 目的片段与表达载体怎么都连接不上
已经有16人回复
- 长片段连接问题
已经有14人回复
- 纠结的分子实验，双酶切连不上，求助
已经有14人回复
- PET-22b原核表达载体构建
已经有2人回复
- （侯氏出品）双酶切连接反应之全攻略
已经有89人回复
- 基因工程课程小结
已经有20人回复
- 构建pBI121表达载体，目的基因与载体连接不上
已经有54人回复
- 外泌型融合蛋白表达载体构建
已经有1人回复
- 转录组研究前沿
已经有21人回复
- 浙江大学2006年分子生物学考博
已经有8人回复
strmond
铁虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3278
- 散金: 10
- 帖子: 216
- 在线: 36.1小时
- 虫号: 2416902
- 注册: 2013-04-14
- 性别: GG
- 专业: 作物种质资源与遗传育种学
8楼2017-05-03 14:49:52
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-06 08:21:00
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-06 08:21:00
| 有没有考虑过载体自连，你应该做个负对照，这样就能比较出，是不是平板上长出来的都是载体自连了 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
T_Stranger3楼2017-04-28 15:12:15
gufeng2008
金虫 (小有名气)
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 1116.6
- 红花: 2
- 帖子: 163
- 在线: 366.6小时
- 虫号: 2815048
- 注册: 2013-11-20
- 专业: 生物化学
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
| 要做对照，估计表达载体pET28酶切不完全，而且连接效率又不高，所以导致空载体长出菌，就会P一个目的条带都没有。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
5楼2017-04-28 15:33:50
douglaspei
金虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 901
- 帖子: 674
- 在线: 85小时
- 虫号: 561112
- 注册: 2008-05-21
- 性别: GG
- 专业: 生物与医学统计学
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-06 08:22:07
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-06 08:22:07
|
是切胶回收的吧？涂板后不要超过14小时，过了就长敏感菌了。载体与目的基因是摩尔数比，不是体积比。 发自小木虫Android客户端 |
6楼2017-04-28 22:37:39
