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T_Stranger新虫 (初入文坛)
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[交流]
表达载体与目的基因连接不上
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胶回收的表达载体pET28与目的基因neua，连接体系为：pET28:1μ，neua:4μ，solution Ⅰ：5μ，过夜连接，在卡那抗性的平板里面长出来部分，全部菌P没有条带，自己分析应该是抗性浓度过低，使得原始感受态长出来部分，可是为什么菌P一个目的条带都没有，已经做了五六次菌p都是这样，有大神能分析一下吗 发自小木虫IOS客户端 |
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| 有没有考虑过载体自连，你应该做个负对照，这样就能比较出，是不是平板上长出来的都是载体自连了 |
T_Stranger3楼2017-04-28 15:12:15
gufeng2008
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| 要做对照，估计表达载体pET28酶切不完全，而且连接效率又不高，所以导致空载体长出菌，就会P一个目的条带都没有。 |
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5楼2017-04-28 15:33:50
douglaspei
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是切胶回收的吧？涂板后不要超过14小时，过了就长敏感菌了。载体与目的基因是摩尔数比，不是体积比。 发自小木虫Android客户端 |
6楼2017-04-28 22:37:39
strmond
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