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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助大神！蛋白跑胶电泳图
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christinaJ

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助大神！蛋白跑胶电泳图 已有1人参与

初次跑蛋白电泳，样品跑完总是块状，使得图是歪的，是哪个环节有问题？？
还有，有时煮完蛋白后有粘稠的东西，是为什么？？煮完后为什么要离心再点样？？离心12000r两分钟可以么？？谢大神！

求助大神！蛋白跑胶电泳图


@biostar2009 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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1楼 2017-04-06 19:22:43
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

丽丽沫

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-06 20:43:10
你用的胶浓度是多大？煮过后一般我是再冰浴3分钟  离心13000r五分钟得 效果还挺好

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4楼2017-04-06 19:45:05
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暖阳丫头

新虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-06 20:43:28
你的上样没有处理好好吧？加入的样品是蛋白上清液呀，肯定要离心，建议多离几分钟

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5楼2017-04-06 20:12:57
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暖阳丫头

新虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-07 07:42:18
引用回帖:
7楼: Originally posted by christinaJ at 2017-04-06 20:15:42
我做了四组，一组是没加iptg诱导的，一组全菌组，一个上清组，一个沉淀组，全都是煮沸后离心，点样是20微升，就是跑出来不是一条线
...

我之前也跑过这样的情况，我的是上样品的没有处理好，有一些小沉淀就跑成这样。虽然你做了沉淀样品，但是你不离心，就把沉淀溶液加到样品槽，电泳的时候跑不动呀，所以还是要把沉淀离心去上清澄清的加样

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10楼2017-04-06 20:54:41
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暖阳丫头

新虫 (正式写手)
建议lz去看看SDS-PAGE电泳原理，应该对你有帮助哈，加油

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11楼2017-04-06 20:58:50
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毛竹0

新虫 (正式写手)
引用回帖:
20楼: Originally posted by christinaJ at 2017-04-08 09:30:12
十个泳道加了九个，我再试试吧，谢谢
...

不客气，空的泳道可以加loading

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21楼2017-04-08 09:31:55
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peterwj2007

新虫 (初入文坛)
细菌样直接煮，粘稠的原因是基因组的原因，可以煮样前超声或者煮样后超声

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24楼2017-04-10 09:28:23
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璐璐sunny

铁杆木虫 (正式写手)
煮完样粘稠是因为样品浓度高，或者是细胞就会这样，我们通常会提高上样缓冲液的浓度。另外如果目的蛋白40，用百分之十或者百分之十二的分离胶就可以了吧

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25楼2017-04-10 09:39:04
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普通回帖

christinaJ

新虫 (初入文坛)
求助大神！蛋白跑胶电泳图-1

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2楼2017-04-06 19:36:33
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christinaJ

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by christinaJ at 2017-04-06 19:36:33

这张图也是，而且我这个片段大小是1100bp，应该是40kDa啊，可我这个显示还不到25，咋回事？？

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3楼2017-04-06 19:38:10
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christinaJ

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 丽丽沫 at 2017-04-06 19:45:05
你用的胶浓度是多大？煮过后一般我是再冰浴3分钟  离心13000r五分钟得 效果还挺好

15％的分离胶，5％的浓缩胶

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6楼2017-04-06 20:13:05
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christinaJ

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 暖阳丫头 at 2017-04-06 20:12:57
你的上样没有处理好好吧？加入的样品是蛋白上清液呀，肯定要离心，建议多离几分钟

我做了四组，一组是没加iptg诱导的，一组全菌组，一个上清组，一个沉淀组，全都是煮沸后离心，点样是20微升，就是跑出来不是一条线

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7楼2017-04-06 20:15:42
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christinaJ

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 丽丽沫 at 2017-04-06 19:45:05
你用的胶浓度是多大？煮过后一般我是再冰浴3分钟  离心13000r五分钟得 效果还挺好

效果挺好是什么意思？跑出来是一条线？

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8楼2017-04-06 20:16:11
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christinaJ

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引用回帖:
5楼: Originally posted by 暖阳丫头 at 2017-04-06 20:12:57
你的上样没有处理好好吧？加入的样品是蛋白上清液呀，肯定要离心，建议多离几分钟

我的意思是离心取上清后，也取了沉淀后，四组一起煮沸后我们好像还要离心，我是不懂为啥还要离心

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9楼2017-04-06 20:18:03
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