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土逗儿

铁虫 (正式写手)


[交流] 膜蛋白怎么有活性的表达?

我最近在做一个膜蛋白的表达。具有糖基化修饰,356个氨基酸,分子量39KD,已经把跨膜区、信号肽全部删掉,并进行密码子优化,用了大肠杆菌表达系统,载体是PET30a,已经尝试往里面加过2种不同的分子伴侣,绝大部分是不可溶形式存在,形成包涵体,his标签,30、50、75咪唑洗杂蛋白,然后500淋洗,能很明显的看到还是有很多杂蛋白。试酶活,感觉酶活性不对,不知各位虫子有什么好的建议?现在再尝试换标签GST,或者使用酵母表达系统?因为我所需要的蛋白量相对较大,百毫克级,不知各位虫子是否有好的建议? @youlinglyw
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土逗儿

铁虫 (正式写手)


7楼2017-03-15 16:37:40
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598878157

版主 (文学泰斗)



土逗儿(金币+1): 谢谢参与
1111111111
12楼2017-03-15 16:55:51
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五色带

禁虫 (知名作家)


土逗儿(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽

19楼2017-03-15 17:34:25
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空城计

新虫 (知名作家)



土逗儿(金币+1): 谢谢参与
23楼2017-03-15 18:00:24
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慢步者

新虫 (知名作家)



土逗儿(金币+1): 谢谢参与
24楼2017-03-15 18:10:45
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zhang001zh

银虫 (小有名气)



土逗儿(金币+1): 谢谢参与
有杂蛋白可以再加其他柱子去纯化啊,酶活性查查看会不会和你删掉的片段有关,可以考虑直接做全长

发自小木虫Android客户端
26楼2017-03-15 18:37:55
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prthefu

木虫 (著名写手)



土逗儿(金币+1): 谢谢参与
同病相怜啊,我也在做一种膜蛋白,大肠杆菌中诱导表达摸索了好几个月,没有进展,现在都不知道蛋白到底有没有表达。我用的载体跟pET骨架相似,然后感受态选用roesetta,但是做着并不理想,现在都不知道有没有表达。
27楼2017-03-18 23:27:42
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简单回复
2017-03-15 16:28   回复  
土逗儿(金币+1): 谢谢参与
祝福 发自小木虫IOS客户端
2017-03-15 16:28   回复  
土逗儿(金币+1): 谢谢参与
nono20094楼
2017-03-15 16:30   回复  
土逗儿(金币+1): 谢谢参与
·
2017-03-15 16:33   回复  
土逗儿(金币+1): 谢谢参与
jufayin6楼
2017-03-15 16:37   回复  
土逗儿(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫IOS客户端
wtbccq5058楼
2017-03-15 16:38   回复  
土逗儿(金币+1): 谢谢参与
psylhh9楼
2017-03-15 16:41   回复  
土逗儿(金币+1): 谢谢参与
天涯201210楼
2017-03-15 16:52   回复  
土逗儿(金币+1): 谢谢参与
天涯201211楼
2017-03-15 16:53   回复  
2017-03-15 17:11   回复  
土逗儿(金币+1): 谢谢参与
^_^ 发自小木虫IOS客户端
贾祚甄14楼
2017-03-15 17:12   回复  
土逗儿(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫IOS客户端
2017-03-15 17:15   回复  
土逗儿(金币+1): 谢谢参与
2017-03-15 17:15   回复  
土逗儿(金币+1): 谢谢参与
黑无天17楼
2017-03-15 17:21   回复  
土逗儿(金币+1): 谢谢参与
祝福 发自小木虫IOS客户端
laom201318楼
2017-03-15 17:26   回复  
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syhorchid20楼
2017-03-15 17:43   回复  
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黑虎符21楼
2017-03-15 17:48   回复  
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m' 发自小木虫IOS客户端
2017-03-15 17:58   回复  
土逗儿(金币+1): 谢谢参与
2017-03-15 18:15   回复  
土逗儿(金币+1): 谢谢参与
。。 发自小木虫Android客户端
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