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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 膜蛋白怎么有活性的表达？
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土逗儿

铁虫 (正式写手)

[交流] 膜蛋白怎么有活性的表达？

我最近在做一个膜蛋白的表达。具有糖基化修饰，356个氨基酸，分子量39KD，已经把跨膜区、信号肽全部删掉，并进行密码子优化，用了大肠杆菌表达系统，载体是PET30a,已经尝试往里面加过2种不同的分子伴侣，绝大部分是不可溶形式存在，形成包涵体，his标签，30、50、75咪唑洗杂蛋白，然后500淋洗，能很明显的看到还是有很多杂蛋白。试酶活，感觉酶活性不对，不知各位虫子有什么好的建议？现在再尝试换标签GST，或者使用酵母表达系统？因为我所需要的蛋白量相对较大，百毫克级，不知各位虫子是否有好的建议？ @youlinglyw
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1楼 2017-03-15 16:10:30
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土逗儿

铁虫 (正式写手)
有人做过类似的嘛 @youlinglyw

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7楼2017-03-15 16:37:40
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598878157

版主 (文学泰斗)
★
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1111111111
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12楼2017-03-15 16:55:51
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五色带

禁虫 (知名作家)
★
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19楼2017-03-15 17:34:25
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空城计

新虫 (知名作家)
★
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安好

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23楼2017-03-15 18:00:24
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慢步者

新虫 (知名作家)
★
土逗儿(金币+1): 谢谢参与
安好

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24楼2017-03-15 18:10:45
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zhang001zh

银虫 (小有名气)
★
土逗儿(金币+1): 谢谢参与
有杂蛋白可以再加其他柱子去纯化啊，酶活性查查看会不会和你删掉的片段有关，可以考虑直接做全长

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26楼2017-03-15 18:37:55
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prthefu

木虫 (著名写手)
★
土逗儿(金币+1): 谢谢参与
同病相怜啊，我也在做一种膜蛋白，大肠杆菌中诱导表达摸索了好几个月，没有进展，现在都不知道蛋白到底有没有表达。我用的载体跟pET骨架相似，然后感受态选用roesetta，但是做着并不理想，现在都不知道有没有表达。
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27楼2017-03-18 23:27:42
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鱼忆阔海2楼
2017-03-15 16:28   回复  
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祝福 发自小木虫IOS客户端
超级老快3楼
2017-03-15 16:28   回复  
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nono20094楼
2017-03-15 16:30   回复  
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·
lww063311225楼
2017-03-15 16:33   回复  
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jufayin6楼
2017-03-15 16:37   回复  
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wtbccq5058楼
2017-03-15 16:38   回复  
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psylhh9楼
2017-03-15 16:41   回复  
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天涯201210楼
2017-03-15 16:52   回复  
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天涯201211楼
2017-03-15 16:53   回复  
惫卧疆场13楼
2017-03-15 17:11   回复  
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^_^ 发自小木虫IOS客户端
贾祚甄14楼
2017-03-15 17:12   回复  
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贾 发自小木虫IOS客户端
miaojiabing15楼
2017-03-15 17:15   回复  
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纳米材料75316楼
2017-03-15 17:15   回复  
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黑无天17楼
2017-03-15 17:21   回复  
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祝福 发自小木虫IOS客户端
laom201318楼
2017-03-15 17:26   回复  
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syhorchid20楼
2017-03-15 17:43   回复  
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黑虎符21楼
2017-03-15 17:48   回复  
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m' 发自小木虫IOS客户端
zhaoyan197822楼
2017-03-15 17:58   回复  
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冬日曙光25楼
2017-03-15 18:15   回复  
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