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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 膜蛋白怎么有活性的表达？
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土逗儿

铁虫 (正式写手)

[求助] 膜蛋白怎么有活性的表达？

我最近在做一个膜蛋白的表达。具有糖基化修饰，356个氨基酸，分子量39KD，已经把跨膜区、信号肽全部删掉，并进行密码子优化，用了大肠杆菌表达系统，载体是PET30a,已经尝试往里面加过2种不同的分子伴侣，绝大部分是不可溶形式存在，形成包涵体，his标签，30、50、75咪唑洗杂蛋白，然后500淋洗，能很明显的看到还是有很多杂蛋白。试酶活，感觉酶活性不对，不知各位虫子有什么好的建议？现在再尝试换标签GST，或者使用酵母表达系统？因为我所需要的蛋白量相对较大，百毫克级，不知各位虫子是否有好的建议？@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw
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1楼 2017-03-15 15:53:54
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土逗儿

铁虫 (正式写手)
诱导条件已经是：14度160rpm
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2楼2017-03-15 15:57:37
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土逗儿

铁虫 (正式写手)
求帮助

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3楼2017-03-15 20:09:58
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mistermo

铁虫 (初入文坛)
我也是刚学这方面，刚好看书有你这个问题，糖基化的蛋白是不能用大肠的，如果是人源蛋白，最好用仓鼠卵巢系统，各种修饰都有，实际就是蛋白来源与表达载体对应，还可以用昆虫系统，最低也要用酵母，但是酵母的修饰和人源的有不同，可能同样没活性

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4楼2017-03-16 06:00:13
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土逗儿

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by mistermo at 2017-03-16 06:00:13
我也是刚学这方面，刚好看书有你这个问题，糖基化的蛋白是不能用大肠的，如果是人源蛋白，最好用仓鼠卵巢系统，各种修饰都有，实际就是蛋白来源与表达载体对应，还可以用昆虫系统，最低也要用酵母，但是酵母的修饰和 ...

仓鼠卵巢系统表达量大吗？

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5楼2017-03-16 08:19:22
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