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膜蛋白怎么有活性的表达？
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| 我最近在做一个膜蛋白的表达。具有糖基化修饰，356个氨基酸，分子量39KD，已经把跨膜区、信号肽全部删掉，并进行密码子优化，用了大肠杆菌表达系统，载体是PET30a,已经尝试往里面加过2种不同的分子伴侣，绝大部分是不可溶形式存在，形成包涵体，his标签，30、50、75咪唑洗杂蛋白，然后500淋洗，能很明显的看到还是有很多杂蛋白。试酶活，感觉酶活性不对，不知各位虫子有什么好的建议？现在再尝试换标签GST，或者使用酵母表达系统？因为我所需要的蛋白量相对较大，百毫克级，不知各位虫子是否有好的建议？@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw |
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2楼2017-03-15 15:57:37
3楼2017-03-15 20:09:58
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我也是刚学这方面，刚好看书有你这个问题，糖基化的蛋白是不能用大肠的，如果是人源蛋白，最好用仓鼠卵巢系统，各种修饰都有，实际就是蛋白来源与表达载体对应，还可以用昆虫系统，最低也要用酵母，但是酵母的修饰和人源的有不同，可能同样没活性 发自小木虫Android客户端 |
4楼2017-03-16 06:00:13
5楼2017-03-16 08:19:22