24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

MolEPI: 1
应助: 67 (初中生)
金币: 25097.5
散金: 404
红花: 34
沙发: 15
帖子: 7454
在线: 961.4小时
虫号: 1430329
注册: 2011-10-07
性别: GG
专业: 作物种质资源与遗传育种学

[求助] 氨苄抗性的PUC18-3HA转化农杆菌GV3101问题已有2人参与

又来求助了

如题，要证明转录因子对启动子的调控，采用pGREEN2-0800-LUC/REN双荧光系统，转录因子是构建到了PUC18-3HA载体上，是amp抗性的。按照操作要转入农杆菌GV3101，第一次抗性弄错了，没长，第二次用amp，整个板子都是，和抗生素失效的感觉一样，也查询了一下，似乎确实有人遇到这样的问题。

接下来要转的话，是要提高抗生素浓度呢，还是更换农杆菌菌株？请过来人指点一二，谢谢。下面是粘贴其他人的资源：

标题: 请问有人将氨苄抗性的表达载体转入农杆菌吗？用的是哪种农杆菌呀？

摘要: [请问有人将氨苄抗性的表达载体转入农杆菌吗？用的是哪种农杆菌呀？] 我把氨苄抗性的表达载体转入农杆菌EHA105、GV3103中，结果12小时就都长了满满一板子，然后又试了下LBA4404，结果又不长。哪位大侠做过的话指导下我吧，我的烟草眼看就不能注射了！关键词:[抗性农杆菌表达载体载体菌株实验室质粒]……
关键词: 抗性农杆菌表达载体载体菌株实验室质粒

我把氨苄抗性的表达载体转入农杆菌EHA105、GV3103中，结果12小时就都长了满满一板子，然后又试了下LBA4404，结果又不长。哪位大侠做过的话指导下我吧，我的烟草眼看就不能注射了！
回复
试试GV3101、EHA103看吧。不是很清楚。
回复
看质粒有没有整合区。没有的话要用90RK菌株用三抗筛选。氨苄最好换成羧卞，加利福平庆大霉素，我记得这个菌株有两个也不三个抗性。有点记不清了这个菌株很难做，楼主再查查。
回复
我们实验室也转化过氨苄抗性的，确实板会长的没法用，后来我们都改用卡纳抗性的载体了
回复
我们实验室也转化过氨苄抗性的，确实板会长的没法用，后来我们都改用卡纳抗性的载体了
不要这样啊，这不是要重做的节奏嘛，我好不容易做好的载体

回复
A4用了吗
没太看懂什么意思
回复
我们DH5a用的AMP,GV3101用的KANA,RIF,CARB,Mgcl2.
回复
用EHA105 将氨苄浓度提高四倍可以筛选出来。
回复
用EHA105 将氨苄浓度提高四倍可以筛选出来。
我正在做这种尝试，希望有用呀
回复
我们DH5a用的AMP,GV3101用的KANA,RIF,CARB,Mgcl2.
谢谢你，我借个GV3101试试。
回复
谢谢你，我借个GV3101试试。...

回复此楼

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有143人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

酵母双杂交AD载体构建已经有13人回复
蓝白斑筛选实验中对照组平板长出很多菌落但是实验组平板上一个菌落没有已经有3人回复

特别喜欢家门口开门的瞬间，宝宝那个高兴呀，蹦蹦跳跳，好不热闹！

1楼2017-02-13 20:18:16

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

chiangscn

银虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 566
红花: 8
帖子: 393
在线: 171.2小时
虫号: 1088294
注册: 2010-09-03
性别: GG
专业: 植物生理与生化

★ ★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+4, 鼓励回帖交流 2017-02-15 07:53:51

我不常上小木虫，但是，每当我看到有人问类似的问题，我就有点担忧。
按理说，导师应该是学生的指导人，是有一定学术水平、有过科班训练、发表过有一定水准的SCI论文、并且能够提供有益的指导、避免缺少或者无经验的学生或下属走弯路的带头人。可惜，国内外，有很多导师并不称职，并不配作为硕士或博士导师，科研已经成为个人捞取名利的手段，全无应有的风度与做派。导致师生反目、学生厌学或抑郁的事情，常有发生。所以，学生选导师，不要看称号、不要看学校，而要看导师本身的水准与实验室条件以及人品。即使你是哈佛毕业的，没有独立一作的拿得出手的论文，你照样没法在科研领域里生存。早些年，只要你是所谓的名校毕业的，没有本事的混混也能拿到好待遇，现在是：不以出身论英雄，也算是一点进步，给底层一点鼓励吧。

我想说的是，从你的载体名可以看出，我猜失败的主要的原因是：你用的是原生质表达用的pUC载体，并不含有T-DNA区等农杆菌载体的特点，故不能在农杆菌里使用。正确的是更换effector质粒为pCAMBIA系列的质粒或者pBI121系列的质粒。我实验室的学生几年过犯过一个类似的错误，被我及时发现阻止了。