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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

MolEPI: 1
应助: 67 (初中生)
金币: 25097.5
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在线: 961.4小时
虫号: 1430329
注册: 2011-10-07
性别: GG
专业: 作物种质资源与遗传育种学

[求助] 氨苄抗性的PUC18-3HA转化农杆菌GV3101问题已有2人参与

又来求助了

如题，要证明转录因子对启动子的调控，采用pGREEN2-0800-LUC/REN双荧光系统，转录因子是构建到了PUC18-3HA载体上，是amp抗性的。按照操作要转入农杆菌GV3101，第一次抗性弄错了，没长，第二次用amp，整个板子都是，和抗生素失效的感觉一样，也查询了一下，似乎确实有人遇到这样的问题。

接下来要转的话，是要提高抗生素浓度呢，还是更换农杆菌菌株？请过来人指点一二，谢谢。下面是粘贴其他人的资源：

标题: 请问有人将氨苄抗性的表达载体转入农杆菌吗？用的是哪种农杆菌呀？

摘要: [请问有人将氨苄抗性的表达载体转入农杆菌吗？用的是哪种农杆菌呀？] 我把氨苄抗性的表达载体转入农杆菌EHA105、GV3103中，结果12小时就都长了满满一板子，然后又试了下LBA4404，结果又不长。哪位大侠做过的话指导下我吧，我的烟草眼看就不能注射了！关键词:[抗性农杆菌表达载体载体菌株实验室质粒]……
关键词: 抗性农杆菌表达载体载体菌株实验室质粒

我把氨苄抗性的表达载体转入农杆菌EHA105、GV3103中，结果12小时就都长了满满一板子，然后又试了下LBA4404，结果又不长。哪位大侠做过的话指导下我吧，我的烟草眼看就不能注射了！
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试试GV3101、EHA103看吧。不是很清楚。
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看质粒有没有整合区。没有的话要用90RK菌株用三抗筛选。氨苄最好换成羧卞，加利福平庆大霉素，我记得这个菌株有两个也不三个抗性。有点记不清了这个菌株很难做，楼主再查查。
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我们实验室也转化过氨苄抗性的，确实板会长的没法用，后来我们都改用卡纳抗性的载体了
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我们实验室也转化过氨苄抗性的，确实板会长的没法用，后来我们都改用卡纳抗性的载体了
不要这样啊，这不是要重做的节奏嘛，我好不容易做好的载体

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A4用了吗
没太看懂什么意思
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我们DH5a用的AMP,GV3101用的KANA,RIF,CARB,Mgcl2.
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用EHA105 将氨苄浓度提高四倍可以筛选出来。
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用EHA105 将氨苄浓度提高四倍可以筛选出来。
我正在做这种尝试，希望有用呀
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我们DH5a用的AMP,GV3101用的KANA,RIF,CARB,Mgcl2.
谢谢你，我借个GV3101试试。
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谢谢你，我借个GV3101试试。...

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特别喜欢家门口开门的瞬间，宝宝那个高兴呀，蹦蹦跳跳，好不热闹！

1楼2017-02-13 20:18:16

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引用回帖:

2楼: Originally posted by Lau_Kimura at 2017-02-14 03:32:12
管它长多长少，有没有挑菌做菌落PCR验证，看有没有转进去。你验证过是不是假阳性了吗？

要验证抗生素是否失效，可以直接用感受态涂板，作为阴性对照的。

新手做实验哪能不设计对照组的呢？你老板知道看打不打 ...

谢谢你的帮助，俺老板不知道呢！