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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

MolEPI: 1
应助: 67 (初中生)
金币: 25097.5
散金: 404
红花: 34
沙发: 15
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在线: 961.4小时
虫号: 1430329
注册: 2011-10-07
性别: GG
专业: 作物种质资源与遗传育种学

[求助] 氨苄抗性的PUC18-3HA转化农杆菌GV3101问题已有2人参与

又来求助了

如题，要证明转录因子对启动子的调控，采用pGREEN2-0800-LUC/REN双荧光系统，转录因子是构建到了PUC18-3HA载体上，是amp抗性的。按照操作要转入农杆菌GV3101，第一次抗性弄错了，没长，第二次用amp，整个板子都是，和抗生素失效的感觉一样，也查询了一下，似乎确实有人遇到这样的问题。

接下来要转的话，是要提高抗生素浓度呢，还是更换农杆菌菌株？请过来人指点一二，谢谢。下面是粘贴其他人的资源：

标题: 请问有人将氨苄抗性的表达载体转入农杆菌吗？用的是哪种农杆菌呀？

摘要: [请问有人将氨苄抗性的表达载体转入农杆菌吗？用的是哪种农杆菌呀？] 我把氨苄抗性的表达载体转入农杆菌EHA105、GV3103中，结果12小时就都长了满满一板子，然后又试了下LBA4404，结果又不长。哪位大侠做过的话指导下我吧，我的烟草眼看就不能注射了！关键词:[抗性农杆菌表达载体载体菌株实验室质粒]……
关键词: 抗性农杆菌表达载体载体菌株实验室质粒

我把氨苄抗性的表达载体转入农杆菌EHA105、GV3103中，结果12小时就都长了满满一板子，然后又试了下LBA4404，结果又不长。哪位大侠做过的话指导下我吧，我的烟草眼看就不能注射了！
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试试GV3101、EHA103看吧。不是很清楚。
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看质粒有没有整合区。没有的话要用90RK菌株用三抗筛选。氨苄最好换成羧卞，加利福平庆大霉素，我记得这个菌株有两个也不三个抗性。有点记不清了这个菌株很难做，楼主再查查。
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我们实验室也转化过氨苄抗性的，确实板会长的没法用，后来我们都改用卡纳抗性的载体了
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我们实验室也转化过氨苄抗性的，确实板会长的没法用，后来我们都改用卡纳抗性的载体了
不要这样啊，这不是要重做的节奏嘛，我好不容易做好的载体

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A4用了吗
没太看懂什么意思
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我们DH5a用的AMP,GV3101用的KANA,RIF,CARB,Mgcl2.
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用EHA105 将氨苄浓度提高四倍可以筛选出来。
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用EHA105 将氨苄浓度提高四倍可以筛选出来。
我正在做这种尝试，希望有用呀
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我们DH5a用的AMP,GV3101用的KANA,RIF,CARB,Mgcl2.
谢谢你，我借个GV3101试试。
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谢谢你，我借个GV3101试试。...

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1楼2017-02-13 20:18:16

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yudaoqian88

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引用回帖:

8楼: Originally posted by chiangscn at 2017-02-14 22:43:21
我不常上小木虫，但是，每当我看到有人问类似的问题，我就有点担忧。
按理说，导师应该是学生的指导人，是有一定学术水平、有过科班训练、发表过有一定水准的SCI论文、并且能够提供有益的指导、避免缺少或者无经验 ...

非常感谢这位老师的帮助。

我硕士博士都在同一个研究所读的，所以对其他实验室了解的不多。前段时间由于实验需要，有幸去中科院植物所一个老师那里学习实验，看到人家的培养模式确实不一样，基本上是小组性质的，一个导师手下有一到两名助理，往下就是学生，导师基本同学生一样来往于实验室，能够给予具体的实验指导。当然，这些大牛的实验室有丰富的科研积淀，有成熟的实验体系，实验路线和技术是我们这些底层实验室所不能比拟的。

我们的情况类似于金字塔，塔尖是老板，是导师，依靠位置优势搞合作拿项目。往下面是小老师，负责课题基本科研事物，基金申请，结题等等等等。学生也是这部分人负责的。但老师们真的是忙呀，导师就更不用说了。在学术水平上，导师更多的是指导方向，具体的实验导师们自己都摇头的，这点无可厚非。小老师们会给学生一些指导，但课题的杂活是在太多，每来一个新人都忙到手足无措。所以具体实验上的指导就别提了，都是学生自己摸索吧。因为老师们不用下实验室，所以脱节了。

我们虽然在学术上没啥成果，但导师本人对我们要求还是挺严格的，开题以及平时汇报都会尽可能邀请专家来指导，这点我们很感激。也听过很多科研院所，相比之下，我们这里对学生的指导帮助，对学生态度等方面算是不错的，有的地方更惨。

再次感谢老师的帮助