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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 实验技术 » 疑惑，请问为什么在做启动子活性的时候测gus酶活，而不做gus基因的定量PCR？
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xdbotany

新虫 (初入文坛)

[交流] 疑惑，请问为什么在做启动子活性的时候测gus酶活，而不做gus基因的定量PCR？ 已有2人参与

如题，基因发挥功能是通过蛋白行使的，但是现阶段很多研究基因对环境的响应是通过qRT-PCR完成的，那研究启动子活力的时候，能不能通过对GUS基因的qRT-PCR结果来判断启动子活力呢？拜谢。
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1楼 2017-01-11 15:23:11
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sunjiutong

金虫 (著名写手)
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楼主爱思考。请问做qRT-PCR简单还是做GUS染色简单，qRT-PCR结果更可靠更直观还是GUS染色更可靠更直观？这就好比你从学校到宿舍本来步行5分钟就到，干嘛还要开车？
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2楼2017-01-11 16:32:20
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xdbotany

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by sunjiutong at 2017-01-11 16:32:20
楼主爱思考。请问做qRT-PCR简单还是做GUS染色简单，qRT-PCR结果更可靠更直观还是GUS染色更可靠更直观？这就好比你从学校到宿舍本来步行5分钟就到，干嘛还要开车？

谢谢你的回答，再多问一句，我觉得研究启动子活力的时候，是不是做GUS基因的qRT-PCR更能真是反映启动子的活力呢？因为GUS基因转录量直接和启动子启动能力大小相关，而蛋白是转录后再翻译的，蛋白合成的因素受很多因素影响，而且时效性不如RNA。当然如果做qRT-PCR还是要染色做验证的。
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3楼2017-01-11 23:58:32
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sunjiutong

金虫 (著名写手)
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你说的有一定道理，但是，若真做qRT_PCR，你拿什么作为参照呢？

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所谓梦想，只有醒来才有可能实现
4楼2017-01-12 01:04:47
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xdbotany

新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by sunjiutong at 2017-01-12 01:04:47
你说的有一定道理，但是，若真做qRT_PCR，你拿什么作为参照呢？

如果是遗传转化得到后代苗子，如T1代烟草和拟南芥，可以选择植物自身的内参，如果是瞬时表达，是否可以使用启动子部分作为内参？
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5楼2017-01-12 18:52:48
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sunjiutong

金虫 (著名写手)
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5楼: Originally posted by xdbotany at 2017-01-12 18:52:48
如果是遗传转化得到后代苗子，如T1代烟草和拟南芥，可以选择植物自身的内参，如果是瞬时表达，是否可以使用启动子部分作为内参？...

野生型植物基因组当中又没有GUS基因，你怎么选择内参？你以为启动子本身可以作为内参啊？启动子又不转录，怎么做荧光定量的内参？？？？小弟，分子生物学学的不过关啊，要加油。
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所谓梦想，只有醒来才有可能实现
6楼2017-01-13 11:23:37
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xdbotany

新虫 (初入文坛)
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6楼: Originally posted by sunjiutong at 2017-01-13 11:23:37
野生型植物基因组当中又没有GUS基因，你怎么选择内参？你以为启动子本身可以作为内参啊？启动子又不转录，怎么做荧光定量的内参？？？？小弟，分子生物学学的不过关啊，要加油。...

感谢你的指点，非常受益。我的意思是T1代苗使用植物自身内参，野生型没有GUS基因不是可以做阴性对照吗？我没太明白你的意思，麻烦你说详细一点，非常感谢。还有我也是考虑到启动子不转录，才觉得可以用作内参，相对来说启动子的数量是个定值，获得GUS基因的转录量与启动子自身的数量的比值就OK了，然而我忘了一个是在转录水平，另个在基因组水平，衰。非常感谢你的指点。
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7楼2017-01-15 11:09:42
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Nila轶

新虫 (正式写手)
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7楼: Originally posted by xdbotany at 2017-01-15 11:09:42
感谢你的指点，非常受益。我的意思是T1代苗使用植物自身内参，野生型没有GUS基因不是可以做阴性对照吗？我没太明白你的意思，麻烦你说详细一点，非常感谢。还有我也是考虑到启动子不转录，才觉得可以用作内参，相对 ...

你好，我想问一下,启动子做定量pcr 时,如何根据gus 基因设计引物

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8楼2020-05-27 15:36:32
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Nila轶

新虫 (正式写手)
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3楼: Originally posted by xdbotany at 2017-01-11 23:58:32
谢谢你的回答，再多问一句，我觉得研究启动子活力的时候，是不是做GUS基因的qRT-PCR更能真是反映启动子的活力呢？因为GUS基因转录量直接和启动子启动能力大小相关，而蛋白是转录后再翻译的，蛋白合成的因素受很多因 ...

染色验证这个,可以直接做T1代植株,还是多种几代后染色才正确

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9楼2020-05-27 15:38:15
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