24小时热门版块排行榜    

查看: 3105  |  回复: 8

xdbotany

新虫 (初入文坛)

[交流] 疑惑,请问为什么在做启动子活性的时候测gus酶活,而不做gus基因的定量PCR? 已有2人参与

如题,基因发挥功能是通过蛋白行使的,但是现阶段很多研究基因对环境的响应是通过qRT-PCR完成的,那研究启动子活力的时候,能不能通过对GUS基因的qRT-PCR结果来判断启动子活力呢?拜谢。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunjiutong

金虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主爱思考。请问做qRT-PCR简单还是做GUS染色简单,qRT-PCR结果更可靠更直观还是GUS染色更可靠更直观?这就好比你从学校到宿舍本来步行5分钟就到,干嘛还要开车?
所谓梦想,只有醒来才有可能实现
2楼2017-01-11 16:32:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xdbotany

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sunjiutong at 2017-01-11 16:32:20
楼主爱思考。请问做qRT-PCR简单还是做GUS染色简单,qRT-PCR结果更可靠更直观还是GUS染色更可靠更直观?这就好比你从学校到宿舍本来步行5分钟就到,干嘛还要开车?

谢谢你的回答,再多问一句,我觉得研究启动子活力的时候,是不是做GUS基因的qRT-PCR更能真是反映启动子的活力呢?因为GUS基因转录量直接和启动子启动能力大小相关,而蛋白是转录后再翻译的,蛋白合成的因素受很多因素影响,而且时效性不如RNA。当然如果做qRT-PCR还是要染色做验证的。
3楼2017-01-11 23:58:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunjiutong

金虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你说的有一定道理,但是,若真做qRT_PCR,你拿什么作为参照呢?

发自小木虫Android客户端
所谓梦想,只有醒来才有可能实现
4楼2017-01-12 01:04:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xdbotany

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by sunjiutong at 2017-01-12 01:04:47
你说的有一定道理,但是,若真做qRT_PCR,你拿什么作为参照呢?

如果是遗传转化得到后代苗子,如T1代烟草和拟南芥,可以选择植物自身的内参,如果是瞬时表达,是否可以使用启动子部分作为内参?
5楼2017-01-12 18:52:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunjiutong

金虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by xdbotany at 2017-01-12 18:52:48
如果是遗传转化得到后代苗子,如T1代烟草和拟南芥,可以选择植物自身的内参,如果是瞬时表达,是否可以使用启动子部分作为内参?...

野生型植物基因组当中又没有GUS基因,你怎么选择内参?你以为启动子本身可以作为内参啊?启动子又不转录,怎么做荧光定量的内参????小弟,分子生物学学的不过关啊,要加油。
所谓梦想,只有醒来才有可能实现
6楼2017-01-13 11:23:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xdbotany

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by sunjiutong at 2017-01-13 11:23:37
野生型植物基因组当中又没有GUS基因,你怎么选择内参?你以为启动子本身可以作为内参啊?启动子又不转录,怎么做荧光定量的内参????小弟,分子生物学学的不过关啊,要加油。...

感谢你的指点,非常受益。我的意思是T1代苗使用植物自身内参,野生型没有GUS基因不是可以做阴性对照吗?我没太明白你的意思,麻烦你说详细一点,非常感谢。还有我也是考虑到启动子不转录,才觉得可以用作内参,相对来说启动子的数量是个定值,获得GUS基因的转录量与启动子自身的数量的比值就OK了,然而我忘了一个是在转录水平,另个在基因组水平,衰。非常感谢你的指点。
7楼2017-01-15 11:09:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Nila轶

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by xdbotany at 2017-01-15 11:09:42
感谢你的指点,非常受益。我的意思是T1代苗使用植物自身内参,野生型没有GUS基因不是可以做阴性对照吗?我没太明白你的意思,麻烦你说详细一点,非常感谢。还有我也是考虑到启动子不转录,才觉得可以用作内参,相对 ...

你好,我想问一下,启动子做定量pcr 时,如何根据gus 基因设计引物

发自小木虫IOS客户端
8楼2020-05-27 15:36:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Nila轶

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xdbotany at 2017-01-11 23:58:32
谢谢你的回答,再多问一句,我觉得研究启动子活力的时候,是不是做GUS基因的qRT-PCR更能真是反映启动子的活力呢?因为GUS基因转录量直接和启动子启动能力大小相关,而蛋白是转录后再翻译的,蛋白合成的因素受很多因 ...

染色验证这个,可以直接做T1代植株,还是多种几代后染色才正确

发自小木虫IOS客户端
9楼2020-05-27 15:38:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xdbotany 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 7lpolszZVXgi 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:08 by 4wMiSEwB6436
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:52 by 4wMiSEwB6436
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 7/350 2026-08-15 00:40 by 4wMiSEwB6436
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-14 22:32 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] filecode +6 cratir 2026-08-14 10/500 2026-08-14 18:29 by 笑叹辞穷
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +6 majunge000 2026-08-11 8/400 2026-08-14 14:44 by 医学老男孩
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
信息提示
请填处理意见