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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 实验技术 » 疑惑，请问为什么在做启动子活性的时候测gus酶活，而不做gus基因的定量PCR？
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xdbotany

新虫 (初入文坛)

[交流] 疑惑，请问为什么在做启动子活性的时候测gus酶活，而不做gus基因的定量PCR？ 已有2人参与

如题，基因发挥功能是通过蛋白行使的，但是现阶段很多研究基因对环境的响应是通过qRT-PCR完成的，那研究启动子活力的时候，能不能通过对GUS基因的qRT-PCR结果来判断启动子活力呢？拜谢。
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1楼 2017-01-11 15:23:11
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sunjiutong

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你说的有一定道理，但是，若真做qRT_PCR，你拿什么作为参照呢？

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所谓梦想，只有醒来才有可能实现
4楼2017-01-12 01:04:47
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sunjiutong

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主爱思考。请问做qRT-PCR简单还是做GUS染色简单，qRT-PCR结果更可靠更直观还是GUS染色更可靠更直观？这就好比你从学校到宿舍本来步行5分钟就到，干嘛还要开车？
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所谓梦想，只有醒来才有可能实现
2楼2017-01-11 16:32:20
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xdbotany

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sunjiutong at 2017-01-11 16:32:20
楼主爱思考。请问做qRT-PCR简单还是做GUS染色简单，qRT-PCR结果更可靠更直观还是GUS染色更可靠更直观？这就好比你从学校到宿舍本来步行5分钟就到，干嘛还要开车？

谢谢你的回答，再多问一句，我觉得研究启动子活力的时候，是不是做GUS基因的qRT-PCR更能真是反映启动子的活力呢？因为GUS基因转录量直接和启动子启动能力大小相关，而蛋白是转录后再翻译的，蛋白合成的因素受很多因素影响，而且时效性不如RNA。当然如果做qRT-PCR还是要染色做验证的。
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3楼2017-01-11 23:58:32
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xdbotany

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sunjiutong at 2017-01-12 01:04:47
你说的有一定道理，但是，若真做qRT_PCR，你拿什么作为参照呢？

如果是遗传转化得到后代苗子，如T1代烟草和拟南芥，可以选择植物自身的内参，如果是瞬时表达，是否可以使用启动子部分作为内参？
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5楼2017-01-12 18:52:48
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