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椰子

新虫 (小有名气)

[求助] NcoI酶切位点的设计 已有1人参与

在基因前面加NcoI酶切位点时,酶切位点上有起始密码子ATG,要怎么处理才能不是自己要表达的基因造成移码突变呢?

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2楼2016-12-31 10:32:11
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Neo2000

木虫 (著名写手)

3楼2016-12-31 12:23:08
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椰子

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Neo2000 at 2016-12-31 12:23:08
ccatggatg,你懂的

那要是表达我的基因,是不是全错了呢,要是在ATGG后面加两个碱基,后面在跟我的基因(基因上的ATG去掉)可以吗?这样相当于多表达了一个氨基酸。但是在N端,会不会影响我的蛋白活性呢?

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4楼2016-12-31 14:15:09
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Neo2000

木虫 (著名写手)

5楼2016-12-31 14:55:14
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椰子

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by Neo2000 at 2016-12-31 14:55:14
你想多了,不会的

什么不会的,那我是加两个碱基还是不加啊,后面直接加我的基因,不用管那么多吗?

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6楼2016-12-31 15:33:00
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椰子

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by Neo2000 at 2016-12-31 14:55:14
你想多了,不会的

谢谢了,不会我师姐设计的时候没有在另外加上两个碱基。她说没有事情,具体我也不清楚。

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7楼2016-12-31 21:34:01
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)

按我理解,两者是都能被转录机器识别的,你只关注你需要的就行了。

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8楼2016-12-31 22:32:18
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chs4502

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 椰子 at 2016-12-31 14:15:09
那要是表达我的基因,是不是全错了呢,要是在ATGG后面加两个碱基,后面在跟我的基因(基因上的ATG去掉)可以吗?这样相当于多表达了一个氨基酸。但是在N端,会不会影响我的蛋白活性呢?
...

我觉得需要加另外两个碱基的,不然就出现移码突变了。

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9楼2016-12-31 22:39:03
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

加碱基,让两个atg同框。会影响蛋白功能吗?小概率。不过没别的选择也没办法

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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
10楼2017-02-16 17:21:19
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