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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » NcoI酶切位点的设计
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椰子

新虫 (小有名气)

[求助] NcoI酶切位点的设计 已有1人参与

在基因前面加NcoI酶切位点时，酶切位点上有起始密码子ATG，要怎么处理才能不是自己要表达的基因造成移码突变呢？

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1楼 2016-12-30 22:52:04
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xiaowoodworm
1

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2楼2016-12-31 10:32:11
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Neo2000

木虫 (著名写手)
ccatggatg，你懂的

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3楼2016-12-31 12:23:08
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椰子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Neo2000 at 2016-12-31 12:23:08
ccatggatg，你懂的

那要是表达我的基因，是不是全错了呢，要是在ATGG后面加两个碱基，后面在跟我的基因（基因上的ATG去掉）可以吗？这样相当于多表达了一个氨基酸。但是在N端，会不会影响我的蛋白活性呢？

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4楼2016-12-31 14:15:09
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Neo2000

木虫 (著名写手)
你想多了，不会的

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5楼2016-12-31 14:55:14
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椰子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Neo2000 at 2016-12-31 14:55:14
你想多了，不会的

什么不会的，那我是加两个碱基还是不加啊，后面直接加我的基因，不用管那么多吗？

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6楼2016-12-31 15:33:00
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椰子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Neo2000 at 2016-12-31 14:55:14
你想多了，不会的

谢谢了，不会我师姐设计的时候没有在另外加上两个碱基。她说没有事情，具体我也不清楚。

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7楼2016-12-31 21:34:01
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)
按我理解，两者是都能被转录机器识别的，你只关注你需要的就行了。

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8楼2016-12-31 22:32:18
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chs4502

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 椰子 at 2016-12-31 14:15:09
那要是表达我的基因，是不是全错了呢，要是在ATGG后面加两个碱基，后面在跟我的基因（基因上的ATG去掉）可以吗？这样相当于多表达了一个氨基酸。但是在N端，会不会影响我的蛋白活性呢？
...

我觉得需要加另外两个碱基的，不然就出现移码突变了。

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9楼2016-12-31 22:39:03
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

加碱基，让两个atg同框。会影响蛋白功能吗？小概率。不过没别的选择也没办法

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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
10楼2017-02-16 17:21:19
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