应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pet28a N端去除 C端保留tag
91/1返回列表
查看: 2746  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

左眼

金虫 (小有名气)

[求助] pet28a N端去除 C端保留tag 已有1人参与

以pet28a为载体，表达的蛋白想保留 C端his tag（N端去除）。
想选择NcoI和XhoI,  不知道这两个酶效率怎么样？
又看到XhoI可能会导致移码，没看到原因或是到底移码多少？ 不知道应该怎么设计才能避免移码保证C端顺利表达tag。
还有看到NcoI有不同种类，想问下NcoI HF和不带HF是有什么区别吗？我应该用什么样的呢？谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-11-26 21:56:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

左眼

金虫 (小有名气)
我在NEB 网站上看见带HF的意思是酶经过。。。之后可以避免星号活性的意思是吧？
赞一下 回复此楼
2楼2015-11-26 22:15:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一个人000
赞

发自小木虫Android客户端
3楼2015-11-26 22:36:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
赞一下
4楼2015-11-26 22:46:04
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

左眼

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 玉皇大帝捷哥 at 2015-11-26 22:46:04
移码很好解决的啊 一个氨基酸对应3个碱基 所以为了保证氨基酸不变你要在移码的地方人为加入碱基 酶切效率可以查看takara的产品目录那本书 有各种限制酶的双酶切效果
...

我知道三个碱基一个氨基酸 但是我不太明白为什么XhoI会导致移码？识别的序列是六个碱基，切完连上不还是六个碱基吗？XhoI是怎么导致移码的？
赞一下 回复此楼
5楼2015-11-26 23:58:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
赞一下
6楼2015-11-27 00:21:16
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
赞一下
7楼2015-11-27 00:22:11
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
左眼: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 谢谢~ 2015-11-27 21:05:02
不知道楼主用的哪个公司的酶，之前用过takara的这两个酶，效率没问题。楼主你应该注意NcoI的移码吧，需要在酶切位点后加2个碱基，XhoI在你说的这种情况下不会造成移码
赞一下 回复此楼
8楼2015-11-27 09:14:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zslqj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by a86052 at 2015-11-27 09:14:43
不知道楼主用的哪个公司的酶，之前用过takara的这两个酶，效率没问题。楼主你应该注意NcoI的移码吧，需要在酶切位点后加2个碱基，XhoI在你说的这种情况下不会造成移码

你好，我想问一下pET28a载体，酶切位点选用Hind3和Xho1，会移码吗？
赞一下 回复此楼
9楼2017-05-27 13:35:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 左眼 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上本子正文33页，违规吗？会被低分嘛？ +11 1234567wang 2026-05-17 13/650 2026-05-20 18:55 by tanfancy
[基金申请] 评审有感 +14 popular289 2026-05-18 23/1150 2026-05-20 17:39 by lincyb
[论文投稿] Sci. Bull. 悲剧经验 +6 jyang1999 2026-05-16 7/350 2026-05-20 16:39 by feng6531
[基金申请] 今年审到国自然15份，谈谈感受 +19 国自然国社科中 2026-05-17 20/1000 2026-05-20 14:14 by 仲夏夜的星星
[基金申请] 国自然评分 +3 无名者登山 2026-05-20 4/200 2026-05-20 13:29 by vito刘
[有机交流] 反应很差，大量原料没有反应 5+3 Mr.Zot 2026-05-19 6/300 2026-05-20 10:36 by xtlilibin
[基金申请] 河北省自然科学基金 +3 Peterchao 2026-05-18 3/150 2026-05-20 08:57 by 霸_霸
[教师之家] 上海大学实验技术岗位非升即走 +12 嘻嘻哈哈乐呵呵 2026-05-15 13/650 2026-05-20 08:34 by xli1984
[文学芳草园] 献血感触 +6 呀呀好傻 2026-05-19 11/550 2026-05-19 22:26 by 而立得乐
[考博] 找博士生导师 +6 小代想上岸 2026-05-15 7/350 2026-05-19 10:22 by free_fisher
[考博] 26/27申博自荐-锂/钠电池方向 5+3 狗头军师. 2026-05-15 4/200 2026-05-19 09:10 by moonboat
[基金申请] 同样的基金本子，换个专家直接从C变A！ (金币-10) +3 国自然国社科中 2026-05-19 3/150 2026-05-19 08:50 by Equinoxhua
[考博] 2026博士还有哪些学校有名额 +7 小王求读研 2026-05-15 8/400 2026-05-19 08:27 by zhyzzh
[考博] 博士申请 +5 星…… 2026-05-18 6/300 2026-05-18 23:49 by 糊糊涂涂好
[硕博家园] 我在等一个没有答案的答案 +3 Love_MH 2026-05-17 3/150 2026-05-18 02:22 by 竹林孤影
[文学芳草园] 半夜喝咖啡 +3 myrtle 2026-05-15 5/250 2026-05-18 01:03 by 小沈2018
[考博] 光量子物理方向 博士招生 1人（2026.09） +3 sandyworld 2026-05-15 4/200 2026-05-17 14:38 by sandyworld
[有机交流] 求助2，4-二氯-5-嘧啶甲醛的合成方法 20+3 光吃不拉 2026-05-14 6/300 2026-05-16 19:46 by Equinoxhua
[硕博家园] 申请博士 +3 呃?呃 2026-05-15 3/150 2026-05-16 11:01 by a4742549
[考博] 26应届毕业生考博求助 +3 wo一定上岸 2026-05-13 3/150 2026-05-14 21:47 by 明海天涯
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭