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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pet28a N端去除 C端保留tag
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左眼

金虫 (小有名气)

[求助] pet28a N端去除 C端保留tag 已有1人参与

以pet28a为载体，表达的蛋白想保留 C端his tag（N端去除）。
想选择NcoI和XhoI,  不知道这两个酶效率怎么样？
又看到XhoI可能会导致移码，没看到原因或是到底移码多少？ 不知道应该怎么设计才能避免移码保证C端顺利表达tag。
还有看到NcoI有不同种类，想问下NcoI HF和不带HF是有什么区别吗？我应该用什么样的呢？谢谢
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1楼 2015-11-26 21:56:13
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左眼

金虫 (小有名气)
我在NEB 网站上看见带HF的意思是酶经过。。。之后可以避免星号活性的意思是吧？
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2楼2015-11-26 22:15:55
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一个人000
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发自小木虫Android客户端
3楼2015-11-26 22:36:03
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匿名

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4楼2015-11-26 22:46:04
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左眼

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 玉皇大帝捷哥 at 2015-11-26 22:46:04
移码很好解决的啊 一个氨基酸对应3个碱基 所以为了保证氨基酸不变你要在移码的地方人为加入碱基 酶切效率可以查看takara的产品目录那本书 有各种限制酶的双酶切效果
...

我知道三个碱基一个氨基酸 但是我不太明白为什么XhoI会导致移码？识别的序列是六个碱基，切完连上不还是六个碱基吗？XhoI是怎么导致移码的？
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5楼2015-11-26 23:58:58
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匿名

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6楼2015-11-27 00:21:16
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匿名

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7楼2015-11-27 00:22:11
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
左眼: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 谢谢~ 2015-11-27 21:05:02
不知道楼主用的哪个公司的酶，之前用过takara的这两个酶，效率没问题。楼主你应该注意NcoI的移码吧，需要在酶切位点后加2个碱基，XhoI在你说的这种情况下不会造成移码
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8楼2015-11-27 09:14:43
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zslqj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by a86052 at 2015-11-27 09:14:43
不知道楼主用的哪个公司的酶，之前用过takara的这两个酶，效率没问题。楼主你应该注意NcoI的移码吧，需要在酶切位点后加2个碱基，XhoI在你说的这种情况下不会造成移码

你好，我想问一下pET28a载体，酶切位点选用Hind3和Xho1，会移码吗？
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9楼2017-05-27 13:35:30
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