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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pet28a N端去除 C端保留tag
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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左眼

金虫 (小有名气)

[求助] pet28a N端去除 C端保留tag 已有1人参与

以pet28a为载体，表达的蛋白想保留 C端his tag（N端去除）。
想选择NcoI和XhoI,  不知道这两个酶效率怎么样？
又看到XhoI可能会导致移码，没看到原因或是到底移码多少？ 不知道应该怎么设计才能避免移码保证C端顺利表达tag。
还有看到NcoI有不同种类，想问下NcoI HF和不带HF是有什么区别吗？我应该用什么样的呢？谢谢
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1楼 2015-11-26 21:56:13
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zslqj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by a86052 at 2015-11-27 09:14:43
不知道楼主用的哪个公司的酶，之前用过takara的这两个酶，效率没问题。楼主你应该注意NcoI的移码吧，需要在酶切位点后加2个碱基，XhoI在你说的这种情况下不会造成移码

你好，我想问一下pET28a载体，酶切位点选用Hind3和Xho1，会移码吗？
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9楼2017-05-27 13:35:30
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左眼

金虫 (小有名气)
我在NEB 网站上看见带HF的意思是酶经过。。。之后可以避免星号活性的意思是吧？
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2楼2015-11-26 22:15:55
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一个人000
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发自小木虫Android客户端
3楼2015-11-26 22:36:03
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匿名

用户注销 (正式写手)
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4楼2015-11-26 22:46:04
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